褶纹冠蚌论文：褶冠蚌过氧化氢酶基因克隆、原核表达及酶活性分析.docVIP

褶纹冠蚌论文：褶纹冠蚌过氧化氢酶基因克隆、原核表达及酶活性分析 【中文摘要】褶纹冠蚌(Crist aria plicata)是我国重要“淡水育珠蚌”之一,近年来褶纹冠蚌频繁受到病害的影响,对其育珠能力产生了极大的影响。本文对褶纹冠蚌过氧化氢酶(cpCAT)的cDNA进行了克隆与原核表达。本文利用RACE-PCR及同源克隆方法,克隆出cpCAT cDNA全长。该基因全长为4863 bp,且有3个外显子,2个内含子。cpCAT cDNA全长为2618 bp,其中编码区1503 bp,5’端不翻译区136 bp,3’端不翻译区979 bp,具有典型的腺苷酸信号序列AATAAA和PolyA尾。该基因序列开放阅读框编码为501个氨基酸,预测蛋白质分子量为56.86kDa,等电点为6.77。BLAST分析显示cpCAT氨基酸序列和动物,植物,细菌的CAT基因有很高的同源性。cpCAT无信号肽,存在过氧化氢酶近端活性位点(61FNRERIPERVVHAKGAG77)和过氧化氢酶近端血红素配体签名序列(351RLYSYSDTH359),两个糖基化位点(145NNTP148)与(436NFSQ439)。系统发育树结果表明褶纹冠蚌与栉孔扇贝(Chlamys farreri)过氧化氢酶基因的亲缘关系最近。利用RT-PCR分析检测cpCAT基因经注射嗜水气单胞菌后的表达情况,结果表明在注射嗜水气单胞菌