细胞培养技术重点讲述.pptVIP

细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。 3、培养细胞生长状况的观察 4、细胞冻存和复苏 低温液氮冷冻贮存 ：-196℃ 原理： 10%的DMSO或甘油 要点：慢冻快融 细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融 冻存方法 （1）预先配制冻存液：80%含血清培养基+10%DMSO+10%血清 （2）吸去培养皿中旧的培养基，加3mlPBS清洗细胞约1min，弃去PBS （3）加入1ml胰酶消化2-3min，观察细胞贴壁情况。待细胞变圆后，小心吸去胰酶，加入3ml含血清的培养基终止消化 （4）将3ml的带细胞培养基加入两个1.5mlEP管中，4℃,1000rmp，离心5min，弃上清 （5）吸取1ml冻存液加入一个EP管中小心吹散细胞，后加入另一个EP管中吹散细胞，两EP管细胞合在一起，加入2ml冻存管中充分混匀 （6）封口：拧紧瓶盖，胶布封好口端，并写明细胞种类、时间、代数。 （7）冻存：4℃冰箱45min→-20℃冰箱2h→-80℃冰箱中24h以上至一周，然后可直接放入液氮罐。 值得注意的地方 1、冻存液应在冻存之前就用培养基配好，避免因临时配制产热而伤害细胞。 2、冻存应取生长状况良好的对数生长期细胞 3、每次冻存的细胞应分装2-3管，隔段时间后取一管复