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生物工艺学复习第二章 工业微生物基础菌种选育的目的和途径 （1）过量（-over）或超量（-super、hyper-）生产目的产物 （2）提高产物纯度，减少副产物 （3）改变菌种性状，改善发酵过程 （4）获得新产物菌种诱变技术1、自发突变 自然界中自发突变频率非常低（10-5-10-8），但一些野生型微生物仍然会有相当高的自发突变，如大肠杆菌。2、理化诱变 传统的理化诱变是最常用的菌种选育手段。采用物理、化学或生物因素诱发菌株发生突变。可大幅提高突变频率100倍，达到10-3-10-6。常见的诱变因子 诱变育种仍用以选育高产量、高生产速率、能利用粗原料、适应特殊发酵条件、副产品少以及动力消耗少的菌株。2.2 传统诱变技术的改进（1）离子束诱变技术 （常用N+离子）（2）激光辐射诱变（3）原生质体诱变（4）诱变时对增变因子的使用原生质体融合定义：用脱壁酶把生物细胞壁除去，原生质体接触、融合、细胞间遗传物质进行传递和交换达到基因重组目的。应用： 高产菌种选育； 双优良性状组合； 合成新产物。新技术：诱变剂直接处理原生质体； 使参与原生质体融合的一方在融合前先行灭活； 电融合技术； 电穿孔法。基因工程 现代生物技术的核心，利用体外重组DNA技术去获得基因或其它序列全新组合的DNA分子，大大提升了传统发酵工业的技术水平。1、基因表达2、分子定向进化定向分子进化 定向分子进化工程是继蛋白质工程之后的第三代基因工程，就是在试管中进行的“分子进化”，是达尔文的进化论思想在核酸、肽或蛋白质以及其他有机物分子等分子水平上的延伸和应用。它通过人工合成或借助于生物表达的手段，人为制造大量突变，然后按照特定的需要和目的，给予选择压力，将满足要求的、适合特定目的的分子筛选出来，从而实现试管中分子水平上的模拟进化。 菌种的高通量筛选 筛选是决定菌种选育效率的一个重要步骤。通过正确、灵敏的筛选方法从大量未变和负变的群体中把仍然是很少量的正向突变挑选出来。 采用微量化仪器和自动操作系统，培养基自动灌注、清洁，以高通量筛选，在短时间内以最少的资源筛选大量的经诱变的群体。 采用96孔板替代摇瓶进行初筛能进行高通量筛选，但难点是如何防止发酵期间的蒸发及菌落形态计算机识别法 用计算机视觉替代人的视觉量化菌落形态特征，并与其性能相联系，形态特征值对应较高的菌种活性，实现菌种的分离筛选。培养基优化方法界面响应方法 均匀设计2.3 菌种的保藏 菌种保藏的基本目的是使菌种不死亡,不被污染,不发生或少发生变异,更进一步可利用现代生物技术构建种质基因文库和DNA文库,对微生物种质资源进行分子水平的保护、保藏和研究。至今保藏方法有20 多种,从总体上可分为4 大类: 传代法、干燥法、冷冻法及冷冻干燥法其原理都是创造一个抑制细胞代谢的环境,如低温,干燥,缺氧,营养缺乏等冷冻干燥法是目前保藏技术领域研究最多并应用最为广泛的一种方法2.4 菌种的扩大培养种子罐级数 制备种子需逐级扩大培养的次数，一般根据菌种生长特性，孢子发芽及菌体繁殖速度以及采用发酵罐体积而定。种龄：种子罐中培养的菌种开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。通常以菌体处于生长旺盛期为合适接种量：移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例。第三章 培养基? 培养基是人工配制的供微生物或动植物细胞生长、繁殖、代谢和合成人们所需产物的营养物质和原料，同时，培养基也为微生物等提供除营养外的其它生长所必须的环境条件。 培养基的组成和配比是否恰当对微生物等的生长、产物的形成，提取工艺的选择、产品的质量和产量等都有很大的影响。但对某一微生物和产品来讲，究竟用哪些原料作培养基还需经过一系列实验的摸索才能确定一种既有利于微生物生长，又能保证得到高产优质的较为理想的培养基配方。工业生产培养基所用的原材料还必须来源丰富、价格低廉、质量稳定一种好的培养基配方还应随菌种的改良、发酵控制条件（pH、溶解氧、中间补料等工艺条件）和发酵设备的变化而作相应的变化碳源碳源是组成培养基的主要成分之一。常用的碳源有糖类、油脂、有机酸和低碳醇。 在特殊情况下（如碳源贫乏时），蛋白质水解产物或氨基酸等也可被某些菌种作为碳源使用。由于菌种所含的酶系统（包括透性酶）不完全一样，各种菌种对不同碳源的利用速率和效率也不一样。 葡萄糖是碳源中最易利用的糖，几乎所有的微生物都能利用葡萄糖，所以葡萄糖常作为培养基的一种主要成分，并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。 但是过多的葡萄糖会过分加速菌体的呼吸，以致培养基中的溶解氧不能满足需要，使一些中间代谢物不能完全氧化而积累在菌体或培养基中，从而抑制微生物的生长和产物的合成。 糖