细胞工程作业总【参考】.docVIP

细胞工程作业1（第一、三、五章） 一、名解： 细胞工程：以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的的利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 细胞全能性：每一个活细胞都包含植物生长发育所必需的全部基因，都具有再生成一个完全的有机体的潜力。 愈伤组织：由脱分化的细胞经过分裂产生的无组织结构无明显极性的松散细胞团，它具有再分化成为完整植物体的潜能。 外植体：植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。 脱分化：又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。 原生质体：植物细胞工程中脱去全部细胞壁的细胞叫 胚胎培养：指对植物的胚及胚器官（如子房、胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。 成熟胚培养：一般是指子叶期至发育成熟的胚的培养。 幼胚培养：是指胚龄处于早期原胚、球形期胚、心形期胚、鱼雷期胚的培养。 胚乳培养：指处于细胞期的胚乳组织的离体培养，它的功能是为胚发育和种子萌发提供营养。 胚珠培养：是指未受精或受精后的胚珠离体培养。 子房培养：是指授粉和未授粉的子房培养。 人工种子：将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮形成的类似种子的颗粒。 植物脱毒：利用物理、化学或生物学方法脱除植物所感染的病毒，在无菌条件下培养不带病毒的植株，进行快速繁育无病毒种苗的技术。 二、问答题： 1、细胞培养有哪些主要设备及途? 超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，CO2培养箱，倒置显微镜，酶标仪、液氮罐、滤器，自动双重纯水蒸馏器，纯水仪等。 自动双重纯水蒸馏器和纯水仪是水处理设备，细胞培养对水的要求较高，至少是使用双蒸水，最好使用三蒸水或超纯水。超净工作台为细胞操作提供无菌环境。压力蒸汽消毒器：湿热消毒。电热干燥箱：干热消毒（玻璃器皿）（160℃，2h）/烘干消毒湿热物品（60℃，24h）。CO2培养箱：用于动物细胞培养，提供精确的温度，维持培养基pH。倒置显微镜：能够从容器底部观察培养的活细胞形态。酶标仪:定量测定培养物中的OD值。 如何测定细胞活力？依据的原理是什么？ 台盼蓝染色法：活细胞不被染色，死细胞染成蓝色，用活细胞占细胞中的百分比表示细胞活力。 MTT（甲基噻唑基四唑）法：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。 试述细胞培养的灭菌方法和各自的适用范围。 物理灭菌法 紫外线消毒：用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。 湿热灭菌 此方法也称为高压蒸汽灭菌，主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。 过滤除菌：一是用超净台对操作空间的空气除菌；二是用滤膜对培养用液和各种不能高压灭菌的溶液（如抗生素、激素、酶液、血清的灭菌。以0．22 μm滤膜除菌最为常用。 火焰灭菌：用于玻璃吸管、培养瓶口的灭菌。 化学消毒法 70％(或75％)酒精 (卫生级) ：最常用的化学表面消毒剂 ，用于手和一些金属器械或工作台面或物体表面的消毒。 0．5％过氧乙酸：是强效消毒剂，10 min即可将芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒，用喷撒和擦拭方式进行。 抗生素抑菌 在细胞培养时，在培养基中添加抗生素，抑制细菌、真菌等污染。 试述细胞冻存的主要方法。 细胞冻存分为两种：一种是低温保存：-20oC左右温度保存细胞；一种是超低温保存：在液氮（-196oC）中保存。超低温冷冻又分为：缓慢冷冻、快速冷冻、预冷冻等。缓慢冷冻法：将处于0℃或其它预处理温度下材料以1-2℃/min的降温速度降到-70℃再投入液氮中。适用于不抗寒的或含大液泡和大量水分的植物材料以及动物细胞。快速冷冻法：将材料在0℃或其它预处理温度下直接放入液氮中进行冷冻。适用于脱水程度高、抗寒性强的材料如种子、花粉、冬芽、茎尖等。预冷冻法（两步法）：第一步用慢冻法降到一定温度（多以0.5-4℃/min的速度降到-40℃左右）并停留一段时间，第二步投入液氮中。适用于多种植物的茎尖、芽、悬浮细胞等。 试述人工种子的制作流程。 1选取目标植物 2通过组织培养诱导形成愈伤组织 3愈伤组织转移到液体培养基中增生扩大 4由愈伤组织获得体细胞胚 5选用合适的人工胚乳包埋体细胞胚，其中含有必需的营养物质、生长因子等成分。 6包裹形成人工种皮 植物组织培养中的调节物质有哪些？各有何作用？ 生长素：刺激细胞分裂和诱导根的分化。 细胞分裂素：引起细胞分裂，诱导芽的形成。 赤霉素：促进细胞生长。 植物组织培养