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动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 1、培养过程 2、培养条件：阅读课本P46 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （合成培养基 上，加入血清，血浆等天然成分） 3、温度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2 （95%空气和5% CO2 ） 二、动物细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 小结： 动物细胞培养和核移植技术都属于无性繁殖，即克隆。 个体通过无性繁殖可连续传代并形成群体，这样的群体就称为无性繁殖系。克隆就是无性繁殖系。 克隆可分三个层次：分子水平（如基因复制）；细胞水平（如细胞培养）；个体水平（如植物组织培养、扦插等）。 思维拓展： 猜想一下，在核移植技术中为何受体细胞要选择卵母细胞？ 动物细胞培养需要经过脱分化的过程吗？ * 提问： 植物细胞工程原理和常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 动物细胞培养的发展历史 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家就此展开了激烈的争论。 1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 一、动物细胞培养 就是从动物机体中取出相关的组织, 分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 幼龄动物 剪碎组织 胰蛋白酶 原代培养 单个细胞 取材（胚胎或幼龄 动物组织、器官） 传代培养 成块的组织中细胞间靠在一起，限制了生长和增殖。 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。 2.为何要将动物组织分散成单个细胞？动物组织细胞间的物质主要是什么？ 细胞增殖能力强，分化程度低，容易培养。 1.为什么一般都选用动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？ 思考： 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 （取材后的初次培养） 传代培养 如何界定原代培养和传代培养？ 细胞固定在表面生长和分裂叫细胞贴壁。当细胞生长到表面相互接触时，就停止分裂，叫细胞的接触抑制。 随细胞增多，多数停止分裂 遗传物质改变 补充合成培养基中缺乏的成分，保证细胞生长增殖 维持培养液的pH 细胞的全能性 大量细胞 植物体 培养结果 获得细胞或细胞产物 快速繁殖、培育品质优良植株等 培养目的 原代培养和传代培养 脱分化和再分化 培养过程 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。 A 练一练： 动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 与植物培养基相比其特点是： （1）液体培养基 （2）含有动物血清等天然成分 动物体细胞大都生活在液体的环境 多莉与“母亲” 1997年，英国科学家韦尔穆特等人完成了首例体细胞克隆动物。多莉的诞生标志着生物技术新时代的来临，在细胞工程方面具有划时代的意义。 卵母细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞核移植 胚胎移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 多莉羊 多莉羊的培育过程 重组细胞 核移植 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 受体细胞： MⅡ期的卵母细胞 （难度较大） 2001年11月3日，我国首例“胎儿上皮细胞”克隆牛“康康”在山东莱阳农学院诞生了。上皮细胞是分化程度很高的体细胞，分化程度越高克隆越难，把它作为供核细胞尚属首例。 2002年2月26日，在山东曹县有五头克隆牛诞生。2003年8月22日，科研人员又对这几只克隆牛实施了人工授精。其中有4头克隆牛成功受孕，成为我国首批克隆牛妈妈。 思考与讨论： 1.用于核移植的供体细胞一般都要选择传代1