第七章重组子的筛选与鉴定简析.ppt

（2）DNase I足迹试验 试验原理： 蛋白结合在DNA片段上，保护结合部位不被DNase破坏，这样，蛋白质在DNA片段上留下了“足迹”，在电泳凝胶的放射性自显影图片上，相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带。 待测双链DNA分子用32P末端标记，并去掉一个末端。 与细胞蛋白提取物结合，加入少量DNase I消化DNA分子。控制酶的用量，达到每个DNA分子只发生一次磷酸二酯键断裂，同时设未加蛋白质的对照。 专门设计检测能同DNA特异结合的蛋白质因子。 待测蛋白质 硝 酸 纤 维 素 滤 膜 能与蛋白质结 合的DNA序列 放射性标记 待测蛋白质 硝 酸 纤 维 素 滤 膜 能与蛋白质结 合的DNA序列 放射性标记 五、DNA-蛋白质相互作用筛选法 一般克隆与筛选策略 六、植物转化体报道基因筛选法 （1）大肠杆菌的β-D-葡萄糖醛酸糖苷酶 （β-D-glucuronidase，GUS）； （2）细菌和萤火虫的荧光素酶 （luciferase）； （3）水母绿色荧光蛋白（GFP）基因 （Green Fluorescent Protein）。 1. 报道基因（reporter gene) （4）其它 2. 几种报道基因的作用原理 4-甲-β-D-葡糖醛酸 荧光产物 GUS GFP 紫外光照 发绿色荧光 5