吸光光度法6.ppt

WZU-Department of Chemistry Material Science 第六章吸光光度法 第六章 吸光光度法 化学分析与仪器分析方法比较 6.1 概述(Brief introduction) 光的波粒二象性 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越 长(频率越低)，光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在 一起。 2．电磁波谱(Electromagnetic waves) 电磁辐射按波长顺序排列，称~。 γ射线→ X 射线→紫外光→可见光→红外光→微波→无线电波 3. 光学光谱区(Spectral region) 6.2 吸光光度法(Spectrophotometry) 1.物质对光的选择性吸收及吸收曲线 吸收曲线(absorption spectrum)的讨论： 2.吸收光谱产生的原理 分子的能级 分子的激发(Excitation) 6.2.3 光吸收基本定律 当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。如图6-3所示，设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir。 在吸光光度分析法中，试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，然后让强度为I0的单色光分别通过这两个吸收池，再测量其透过光的强度。此时反射光强度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消。 透射比或透光度 （Transmittance） 透过光强度It与人射光强度Io之比称为透射比或透光度，用T表示溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小;相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。 朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别 于1760和1852年研究了光的吸收与溶液层的 厚度及溶液浓度的定量关系，二者结合称为 朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长 度为b的液层、浓度为c的溶液时，由于溶液 中吸光质点(分子或离子)的吸收，通过溶液后 光的强度减弱为I： * 朗伯-比尔定律表明：当一束单色光通过含有吸光物质的溶液后，溶液的吸光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比。这是进行定量分析的理论基础。比例常数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。 * 含有多种吸光物质的溶液，由于各吸光物质对某一波长的单色光均有吸收作用，若各吸光物质的吸光质点之间相互不发生化学反应，当某一波长的单色光通过这样一种含有多种吸光物质的溶液时，溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。这一规律称吸光度的加和性。 2. 摩尔吸收系数和桑德尔灵敏度 * 摩尔吸收系数 molar absorptivity 当浓度c用mol·L-1，液层厚度b用cm为单位表示，则K用另一符号ε来表示。ε称为摩尔吸收系数，单位为L·mol-l·cm-1，它表示物质的量浓度为l mol·L-1，液层厚度为l cm时溶液的吸光度。 * 桑德尔(Sandell)灵敏度(灵敏度指数) S来表示。S是指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量，其单位为μg·cm-2，S与ε及吸光物质摩尔质量M的关系为： 摩尔吸光系数(?)的讨论 摩尔吸光系数(ε)的讨论 6.3 比色法和吸光光度法和及其仪器 方便、灵敏，准确度差。 2. 吸光光度法和分光光度计(spectrophotometer) 光路示意图 分光光度计内部光的传播途径 可见分光光度计 可见分光光度计 3. 分光光度计的主要部件 1. 光源(Light source)：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320 ～ 2500 nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180 ～ 375 nm) 2. 单色器(monochromator)：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 棱镜:玻璃350 ～ 3200 nm, 石英185 ～ 4000 nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便 3.吸收池(cell):用于盛待测及参比溶液。 玻璃 — 能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英 — 不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 光电管 光电倍增管 5. 指示器(display) 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录 6.4 光度分析法设计 1. 对显色反应的要求 *灵敏度高，一般ε104 *选择性好， *组