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? 紫外-可见吸收光谱法 ultraviolet-visible  spectrophotometry, UV-VIS 双原子分子的能级跃迁 有机化合物分子中电子跃迁的能量 4.光多道二极管阵列检测光度计： 芦丁含量测定 （二）多组分定量方法 （三）双波长法： （四）示差分光光度法：选择Cs比 Cx 略大或略小为参比溶液，A= |As-Ax| =εb|Cs-Cx|,求出Cx。 高浓度测定法：标液浓度略小于待测 液，调T 100 % 低浓度测定法：标液浓度略大于待测 液，调T 0 % 高精度测定法： （三）双波长法： ? 紫外-可见吸收光谱法 ultraviolet-visible  spectrophotometry, UV-VIS （二） 多 组 分 定 量 方 法 紫 外 - 可 见 分 光 光 度 计 基 本 结 构 光源 单色器 吸收池 检 测 系 统 读 出 装 置 可见光区：钨灯和卤钨灯； 紫外光区：氢灯和氘灯。 光源 作用：提供入射光。 要求：连续光谱、辐射强、稳定性好。 单色器 作用 把来自光源的复合光分解为单色光，并分离出所需要波段的光束。 色散元件常用棱镜和光栅。 吸收池 玻璃吸收池 石英吸收池 检测器 作用：检测光信号，并将光信号转变为电信号。 分光光度计多用光电管或光电倍增管作为检测器。 紫外-可见分光光度计的类型 1.单波长单光束分光光度计 2.单波长双光束分光光度计 3.双波长分光光度计 1.适宜的吸光度范围 吸光度测量误差最小点： A=0.4343， T= 0.368 以暗噪音为主时： A 0.2~0. 7 以信号噪音为主时： A 0.1~2.0 满足要求 仪 器 测 量 条 件 的 选 择 根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。 当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。 2. 入射光波长的选择 3．狭缝宽度的选择 以减少狭缝宽度时试样的吸光度不再增加为准。 作用： 消除其它成分及吸收池和溶剂等 对光的反射和吸收带来的测定误差。 参比溶液的选择 常用的参比溶液： 1．溶剂参比 消除溶剂与吸收池等干扰； 2．试样参比 消除试样基体溶液、溶剂及吸收池等干扰； 3．试剂参比 消除显色剂、其它试剂溶剂与吸收池等干扰因素； 4. 平行操作参比 各种干扰。 紫外-可见吸收光谱法的应用 紫外-可见吸收光谱除主要用于定量分析，也用于定性分析、纯度鉴定、结构分析。 （一） 单组分定量方法 校准曲线法 标准对比法 吸收系数法 当溶液中各组份的吸收光谱互相重叠，且均符合定律，可利用吸光度的加和性原则处理。 A1=ε11C1b+ε12C2b A2=ε21C1b+ε22C2b n个组份列出n元一次方程组求解。 对没有适当吸收的物质进行测定，常利用显色反应将被测组分转变为在一定波长范围有吸收的物质。常见的显色反应有配位反应、氧化还原反应等。 二、显色反应条件的选择 显色反应必须满足的条件： 1．反应的生成物必须在紫外-可见光区有较强的吸光能力，即摩尔吸光系数较大； 2．反应生成的产物有足够的稳定性，以保证测量过程中溶液的吸光度不变； 3.反应有较高的选择性，即被测组分生成的化合物吸收曲线应与共存物质的吸收光谱有明显的差别； 4.反应生成物的组成恒定。 显色条件 1．酸度 3. 显色时间和温度 2. 显色剂的用量 4. 稳定性 5. 掩蔽 §5 紫外-可见吸收光谱法的应用 紫外-可见吸收光谱除主要用于定量分析，也用于定性分析、纯度鉴定、结构分析。 一 定性分析 与标准品吸收曲线比较； 与标准吸收光谱