第21章：免疫学检测及相关实验技术范例.ppt

免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用。 ?免疫学技术的应用极为广泛, 疾病的诊断、疗效评价及理论研究等。 第一节 免疫学检测原理 细胞水平检测 分子水平检测 基因水平检测 一、免疫细胞的检测 对机体参与免疫应答的细胞进行分离、纯化、鉴定、计数及功能测定。 (一) 免疫细胞分离与纯化 (二) 免疫细胞功能测定 1. T细胞功能测定 (1) 细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝裂原和特异性抗原两类。 * 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念珠菌等； * 同种MHC及抗CD3单抗等 * 肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养 2. B细胞功能测定 (1) B细胞增殖(转化)试验 (2) 溶血空斑形成试验 (3) 反向溶血空斑试验 (4) 酶联免疫斑点法(ELISPOT): 一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌量的体外实验方法。 3. NK细胞活性测定 (1)形态学检查法 (2)放射性核素释放法： 用放射性核素(51Cr、125I －UdR)标记靶细胞 (3)酶释放法： 测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的乳酸脱氢酶(LDH)活性 (4)化