外周血气道平滑肌祖细胞检测在喘息儿童中.docVIP

外周血气道平滑肌祖细胞检测在喘息儿童中 应用价值研究的可行性报告 一、项目实施的背景和意义 1.1 背景 支气管哮喘（简称哮喘）是常见的慢性呼吸道疾病，近年来其患病率在全球范围内有逐年增加的趋势。80％以上的哮喘起始于3岁前，5岁以下儿童5岁以下儿童喘息分成3种临床表型：(1)早期一过性喘息(2)早期起病的持续性喘息(指3岁前起病)(3)迟发性喘息/哮喘第1、2种表型只能通过回顾性早期干预(1)正常气道平滑肌细胞受到哮喘某些因素影响后自发分裂增殖；(2)外周血中祖细胞迁移植入；(3)成纤维细胞转化而成[2]。按这些研究，在儿童喘息性疾病中可能存在外周血气道平滑肌祖细胞过度增长现象，而此现象可能导致喘息儿童发展为哮喘气道重塑。 1.2 项目实施的意义 通过检测不同喘息症状儿童外周血中气道平滑肌祖细胞水平，将对有喘息症状的儿童发展成哮喘的预后提供一个理论依据，为哮喘的早期诊断提供新的方法。 二、项目涉及的相关技术在国内外的研究现状和发展趋势 喘息或哮喘由于不均一的发病条件和不同的发病机制，产生症状持续时间和严重性的不同，使儿童喘息与以后发展为哮喘是由于免疫系统成熟或先天性或获得性气道修饰所致难以进行鉴别[3]。一过性喘息肺功能往往正常，而严重喘息的肺功能损害，症状可持续，发展为哮喘，这些发展与婴幼儿接触的环境，产生的IgE和特应性体质有关[4]。也就是说，在一些特应性体质喘息病人，由于某些原因导致哮喘的病理改变，使症状持续。国内外的研究发现具有肺功能损害的持续性哮喘患者，其肺功能损害往往开始于学龄前期，因此从喘息的学龄前儿童中把可能发展为持续性哮喘的患儿识别出来进行有效早期干预是必要的。是目前尚无特异性的检测方法和指标，可用于对学龄前喘息儿童作出哮喘的确定诊断。smooth muscle progenitor cells，SPCs)是能在体内外直接分化为平滑肌细胞的前体细胞。祖细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞群体，根据发生的来源，祖细胞可被分为两类：胚胎祖细胞和成体祖细胞。胚胎祖细胞和成体祖细胞除了来源不同，其最大的区别在于增殖能力和分化潜能的不同。胚胎祖细胞可无限增殖，而成体祖细胞的增殖能力则有限。以前研究认为气道平滑肌细胞通过细胞增殖、肥大、迁移和分泌细胞外基质等改变参与慢性哮喘的气道重塑，既住的研究也发现在哮喘气道重塑过程中存在平滑肌细胞的迁移现象，但对出现迁移的平滑肌细胞的来源和机制尚未明确[5]。近年来发现气道平滑肌细胞的增多与外周血循环中的平滑肌祖细胞迁移植入有关。在既往许多哮喘研究中发现：①哮喘动物外周血和肺组织中的CD34细胞出现增加[6,7]；②PDGF-BB参与了哮喘气道重塑的相关机制的调控[8,9]，但是学者并没有对这两个现象产生的机制及意义给出令人信服的答案。然而PDGF—BB(血小板衍生生长因子一BB)和CD34+均与平滑肌祖细胞密切相关，前者是平滑肌祖细胞的分化诱导的调控因素，后者是平滑肌祖细胞的重要特征标志之一。综合以上两个现象，提示了存在平滑肌祖细胞参与哮喘气道重塑的可能性，即平滑肌祖细胞在特定哮喘炎性因子的趋化作用下，参与了慢性哮喘的气道重塑。 有研究表明，在哮喘病人中外周血气道平滑肌祖细胞表达增加，Wang等[10]检测了哮喘和COPD病人外周血中表达I型胶原（COL-I）和CD45和/或CD34成纤维细胞CD34+CD45+Col-I+ cells）（用α-smooth muscle actin α-肌动蛋白鉴定）发现其在有肺功能损害病人中显著增高，并能经TGF-b（转化因子b）转化为成纤维肌细胞，伴有肺功能损害的哮喘病人其占NANT（非粘附非T细胞）达27.6±3.2%,而无肺功能损害哮喘和正常对照中仅为6.4%,左右。在胡海洋[11]博士论文研究中发现：哮喘组大鼠的外周血单个核细胞中平滑肌祖细胞（SM-MHC(平滑肌肌凝蛋白重链)和CD34+）含量要高于正常对照组大鼠。认为在哮喘状态下平滑肌祖细胞可能受到特定炎性因子刺激下，数量上升并参与到哮喘的致病过程中。另有研究表明，哮喘中可能存在成纤维祖细胞更易转化为成纤维肌细胞[12] 。用卵蛋白刺激的小鼠CD45阴性和表达 Stro-1、Sca-1、CD73 和CD105阳性的成纤维细胞祖细胞在肺内定植增加[13]。应用green fluorescent protein (绿色荧光蛋白GFP)嵌合小鼠I型胶原 (Col-I)和GFP+和 α-平滑肌肌动蛋白+ (α-SMA) GFP+细胞显著增高。说明气道重塑中平滑肌细胞来源于骨髓中多能祖细胞[14]。将骨髓间充质祖细胞鼠儿童发展为持续性哮喘SPC所使用的细胞标记大多都是祖细胞、内皮祖细胞、平滑肌细胞等细胞的标记，未能找到SPC区别于其他细胞的特异性分子标记。已知它可以表达SMa—actin