专题五DNA的粗提取与鉴定上课用详细资料.ppt

一、提取血细胞核物质 问题：这时的滤液可能含有哪些细胞成分？ 主要有DNA、RNA、核蛋白、多糖等 我们应该如何将DNA单独分离出来？ 二、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。 三、析出含DNA的粘稠物 缓慢贴壁加入蒸馏水，并用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为0.1～0.2mol/L，直到溶液中丝状物不再增加时为止。 四、滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤上一步中的溶液至1000mL的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上。 五、将DNA的黏稠物再溶解 取一个50mL的烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液20mL，用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。 六、过滤含有DNA的氯化钠溶液 取一个100mL的烧杯，用放有两层纱布的漏斗，过滤上一步中的溶液，取其滤液，DNA溶于滤液中。 七、提取含杂质较少的DNA 纯化：向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷却的体积分数为95%乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现含杂质较少的DNA丝状物。 用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。注意观察：丝状物是什么颜色的？ 八、DNA的鉴定 溶解：在物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，放入丝状物，用玻璃棒搅拌，使之溶解。同时设置不放入丝状物的对照组。 显色：加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。观察颜色变化。 * §5.1 DNA的粗提取与鉴定 宜州市一中 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2.提取DNA的基本思路 提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等 在物理和化学性质方面的差异 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； 或者让其他成分溶解， DNA析出 3.DNA等大分子的理化性质 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑵ DNA不溶于酒精溶液（95%冷酒精） ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 试剂： （二）DNA的鉴定 条件： 二苯胺 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 沸水浴 现象： （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）除去滤液中的杂质(纯化) （四） DNA的析出与鉴定 二、实验设计 （一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种 原则： 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的组织 从核DNA数目来看：猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。 液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。 鱼卵是减数分裂的产物。 鸡血 合适的材料： 菜花 鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；极易吸