第17章 荧光光分析仪和原子光谱分析仪教学指导.docVIP

第十七章 荧光光谱分析仪和原子光谱分析仪 首 页 基本要求 重点难点 讲授学时 内容提要 1．基本要求 1.1掌 握 1.1.1掌握荧光分析的基本原理和荧光光谱仪的组成。 1.1.2掌握原子吸收分光光度计和原子发射光谱仪的基本原理和结构。 1.2 熟 悉 1.2.1熟悉荧光光谱仪的调试、使用及维护。 1.2.2熟悉原子吸收分光光度计的性能。 1.3 了 解 1.3.1了解荧光光谱仪的临床应用。 1.3.2了解原子光谱分析仪的临床应用。 2．重点难点 2.1重 点 荧光光谱仪的基本原理、基本结构、分类、调试及使用。 原子吸收分光光度计的基本原理、基本结构及使用。 2.2 难点 2.2.1荧光光谱仪的基本原理和基本结构。 2.2.2原子吸收分光光度计和原子发射光谱仪的异同。 3．讲授学时 建议4学时～6学时 4．内容提要 4.1荧光光谱仪 4.1.1 荧光发生的机制 物质的分子吸收了照射光（如紫外线）的高能量后，处于基态最低能级的分子，被激发到第一电子激发态和其它电子激发态的各个振动能级。到达激发态的各个振动能级的分子，和周围的分子（如溶剂分子）碰撞，并把部分能量以热能的形式传给周围的分子，自己降落到单线第二电子激发态的最低振动能级。然后，由此最低振动能级向基态的各个振动能级跃迁，同时以发光的形式释放出其能量。简言之，物质经高能量射线激发后，所发出的比原激发光波较长的可见光称为荧光。荧光的发生和強度与物质的分子结构有着密切的关系。 4.1.2激发光谱和荧光光谱 任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱，即激发光谱和荧光光谱。它们是荧光分析中定性和定量的基础。 激发光谱：将激发光的光源用单色器分光，连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长的激发光照射下，物质溶液发射的荧光强度的变化，以激发光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，即可得到荧光物质的激发光谱。从激发光谱图上可找到发生荧光强度最强的激发波长λex。 荧光光谱：选择λex作激发光源，并固定强度，而让物质发射的荧光通过单色器分光，测定不同波长的荧光强度。以荧光波长作横坐标，荧光强度为纵坐标作图，便得荧光光谱。荧光光谱中荧光强度最强的波长为 λem 。 荧光物质的最大激发波长（λex）和最大荧光波长（λem）是鉴定物质的根据，也是定量测定中所选用的最灵敏的波长。 4.1.3 荧光光谱仪的工作原理和主要结构 对于某一荧光物质的稀溶液，在激发光的频率、强度以及液层厚度不变时，此荧光物质所发出的荧光强度与溶液的浓度成正比关系。由此可以通过测定荧光强度来求出该物质的含量。荧光分析法和紫外、原子吸收分析方法有本质的不同。它所测量的是待测物质所发射的荧光强弱，而不是物质对光谱的吸收强弱，属于发射光谱分析。 荧光分光光度计的结构包括五个基本部分：①?激光光源：用来激发样品中荧光分子产生荧光。常用汞弧灯、氢弧灯及氘灯等，目前荧光分光光度计以用氘灯为多。②?单色器：用来分离出所需要的单色光。仪器中具有两个单色器，一是激发单色器，用于选择激发光波长；二是发射单色器，用于选择发射到检测器上的荧光波长。③?样品池：放置测试样品，用石英做成。④检测器：作用是接受光信号，并将其转变为电信号。⑤记录显示系统：检测器出来的电信号经过放大器放大后，由记录仪记录下来，并可数字显示和打印。 4.1.4荧光光谱仪的应用 荧光光谱仪的主要用途包括：①常规分析（如定性和定量分析、化学表征、色谱流出物的检测等）；②获得分子信息（如测量分子内间距、决定键合平衡、研究结构变化等）；③用于医药研究（如何研究膜结构和功能、确定抗体的形态、研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学过程等）；④环境监测（如水和空气中污染物的鉴别和计量）等。 4.2 原子光谱分析仪 4.2.1 原子光谱分析仪特点与分类 原子光谱分析仪具有分析速度快、操作简便、选择性好、灵敏度高、测定范围广、试剂用量少等多种优点，可同时测定多种元素，一般情况下不必进行复杂的分离处理。缺点是不能同时测定多个元素，而且有些元素的测定灵敏度还有待提高。 原子光谱分析仪器主要有原子吸收光谱仪、原子发射光谱仪和原子荧光光谱仪。 4.2.2 原子吸收光谱仪 原子吸收光谱仪基本工作原理是测定气态的自由原子对某种特定光谱的吸收。其结构原理与普通的分光光度计是相似的，只是用锐线光源代替了连续光源，用原子化器代替通常的吸收池。空心阴极灯或无极放电灯发生相应待测元素特征波长的射线，它穿过火焰，把试样的溶液以细粒子流的形式喷射到火焰上，部分射线被吸收。这一部分正比于试样的浓度，测量吸收量将其与标准溶液进行对比，从而确定浓度。 ．原子吸收光谱仪基本结构