2革兰染色概要.pptVIP

教师：梁坤伦 一、目的 葡萄球菌、大肠杆菌菌液各一支 革兰氏染色液一套 ⑴结晶紫染液 ⑵碘液 ⑶95%酒精 ⑷稀释石炭酸复红液 生理盐水、载玻片 接种环、酒精灯、显微镜 （一）细菌标本片制作： 涂片 干燥 固定 涂片 挑取少细菌与盐水混匀，涂成直径约1cm的薄膜。 干燥 涂片最好在室温自然干燥 固定 用玻片夹夹住玻片一端，标本面向上，快速过火3次，以玻片反面触及皮肤不觉过烫为度。 （二）革兰氏染色法 初染：滴加结晶紫液于涂片上，1min后水洗; 媒染：加媒染剂碘液，1min后水洗; 脱色：加95%酒精数滴于玻片上，频频摇晃数秒后斜持玻片，使酒精流去，再滴加酒精，如此反复2～3次，直到流下的酒精无色稍呈淡紫色为止，水洗; 复染：加稀释石炭酸复红液30s后，水洗，洒去积水，用吸水纸吸干，油镜检查。 （二）革兰氏染色法 初染：滴加结晶紫液 媒染：加碘液 脱色：加95%酒精 复染：加石炭酸复红液 五、结果 1.经革兰氏染色后，为什么细菌会呈现两种 不同颜色？ 2.要做好革兰氏染色，应注意哪些关键步骤？ * * 实验二 细菌标本片的制备 革兰染色 （2学时） 掌握细菌标本片制作及革兰氏染色方法。 革兰氏染色法原理可能与两方面因素有关： 二、原理 ①G+菌细胞壁结构致密，粘肽层厚，酒精不易透入，阻止染料由细胞内渗出。G-菌的细胞壁较疏松，粘肽层薄，脂质含量多，酒精易透入被脱色。 ②G+菌等电点（pH2～3）比G-菌（pH4～5）低，G+菌所带负电荷比G-菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合牢固，不易脱色。 细胞壁 细胞膜 细胞质 基本结构： 特殊结构： 荚膜 鞭毛 菌毛 芽胞 核糖体 G+菌和G-菌细胞壁 G+菌细胞壁 G－菌细胞壁 肽聚糖 外 膜 磷壁酸 脂多糖 细胞膜 三、材料 取1～2环生理盐水 挑取少细菌与盐水混匀，涂成直径约1cm的薄膜。 四、方法 葡萄球菌 大肠杆菌 G+ G- 紫色 红色 油镜观察 G+菌呈紫色；G-菌呈红色。 实验报告： 绘图表示革兰氏染色的结果。 六、思考题 *