2012高三生物二轮复习讲义：高频考点 基因工程.docVIP

核心知识备查 1.基因工程的基本工具 2.基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取途径 ①直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。 ②人工合成目的基因 a.化学合成法：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。 b.人工合成法：以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。 c.利用PCR技术获得。 (2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建 (3)将目的基因导入受体细胞——转化 ②转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 (4)目的基因的检测与鉴定 ①检测： a.导入检测：DNA分子杂交法(使用DNA探针)。 转录检测：分子杂交法检测mRNA b.表达检测 翻译检测：免疫法，提取蛋白质，用相应的 抗体进行抗体—抗原杂交 ②鉴定：从个体生物学水平鉴定，如对转基因作物进行抗虫或抗病等的接种实验。 点拨： ①切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的黏性末端，有利于重组质粒的构建。 ②只有第三步“将目的基因导入受体细胞”过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发生碱基互补配对。 【例1】(2011·海南高考)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端