11.4第十一章遗传物质的分子基础.ppt

粘粒（cosmid）载体（45kb） 细菌人工染色体BAC（300kb）bacterial artificial chromosome 酵母菌人工染色体YAC（1Mb）yeast artificial chromosome Ti质粒 Ti质粒是根癌农杆菌的染色体外遗传物质 双链闭合环状DNA，150～200kb 植物基因工程常用的载体 Ti质粒结构 T-DNA Transfer DNA 是农杆菌侵入植物细胞时从Ti质粒上转移到植物细胞的一段DNA T-DNA两端个有一段25bp的同向重复序列，是T-DNA的边缘区 LB；RB 在同一条单链的LB和RB内各形成一个缺口，单链T-DNA进入植物细胞 三. 基因的分离与鉴定 从基因库中分离基因 聚合酶链式反应(PCR)扩增基因 人工合成基因 T－DNA标签法 (一)从基因库中分离基因 1．构建基因库 2．筛选基因库 3．阳性克隆的分析与鉴定 1．构建基因库 基因库 (library)是一组DNA或cDNA序列克隆的集合体。 创建基因文库的目的是从特定的材料中分离目的DNA片段或基因。 把所有的基因集中在一个库中，采用一定的方法在库中筛选目的基因。 同时也便于基因的长期保存。 基因组文库 Genomic DNA library 使用与切割载体相同的限制酶，将供体生物的基因组DNA切割成许多片段 将