J-24 发酵程制药 第五节 四环素类抗生素 第六节 氨基糖苷类抗生素的生产.docVIP

第十讲 授课内容 第五节 四环素类抗生素的生产 第六节 氨基糖苷类抗生素的生产 授课时数 2 教学目标 掌握四环素类抗生素特性和制备工艺 教学重点 四环素类抗生素特性和制备工艺 教学难点 简述四环素的提取和精制过程。 教材教具 教学内容（含教学步骤、时间分配、教法学法、作业布置等） 复习红霉素特性和制备工艺。复习四环素类抗生素类的结构特点和共同功能。 导入新课： 四环素是四环素类抗生素的典型例子，我们通过学习四环素的生产原理和过程，可以了解四环素类抗生素的生产过程。 四环素类抗生素：是以四并苯为母核的一类有机化合物。 第五节 四环素类抗生素的生产 一、四环素类抗生素的结构特性和作用机制 1、结构特性 画出金霉素、土霉素、四环素、地美环素结构。 母核：四并苯。 酸性基团：酚羟基、烯醇羟基 两性化合物 碱性基团：二甲氨基（制备成盐酸盐供临床应用） 2、分类 天然类：金霉素、土霉素、四环素、地美环素（去甲金霉素） 半合成类：多西环素、美他环素、米诺环素等。 3、抗菌谱 广谱，细菌（除铜绿假单胞菌），螺旋体、支原体、立克次体、衣原体。 抑制细菌生长、作用较弱（不及青霉素类或链霉素类）。 4、特点 耐药较严重，急性毒性很低，副作用多。 5、作用机制 与微生物核糖体结合（30S亚基）→抑制蛋白质合成。 二、四环素类抗生素的理化特性 1、黄色结晶粉末、味苦。 2、两性化合物 3、溶解性 等电点pH=5.4（在等电点时，四环素呈游离碱的形式，溶解度最小）。 在pH=4.5～7.2，四环类抗生素难溶于水。 不易溶于水，其盐水溶性也差，故不易配制成注射液。 能与各种酸、碱形成盐，盐酸盐最重要。（四环素、金霉素的理论效价以盐酸盐为标准，土霉素以游离碱为标准，1 mg = 1000 U） 4、能形成螯合物与复合物 （1）在碱性的溶液中，与金属离子形成螯合物沉淀，如：钙、镁、钡离子 （吸收受乳制品及二、三价阳离子 影响——配伍禁忌）。 （2）与其他物质形成复合物沉淀，如：长烃链的季铵碱、尿素、氯化钙等 复合物不溶于水；溶于有机溶剂，分离成四环素和尿素。 四环素+尿素→四环素-尿素复合物（C22H24N2O8CO(NH2)2） 5、稳定性 四环素类药物在干燥条件下稳定。 但遇光色加深。在酸性或碱性溶液中不够稳定，或药效显著降低、或产生毒性（密闭、防潮、避光保存）。 三、四环素的发酵生产 （一）孢子制备 1、生产菌种 四环素←————金色链霉菌————→金霉素 （＋抑氯剂：溴化钠和M促进剂） （＋氯化钠） 生绿链霉菌、佐山链霉菌等也能产生四环素。 2、控制要点 （1）进行简单的自然分离，（2）节约砂土管的用量。 麸皮琼脂斜面，36℃，4～5d （二）种子制备 30～32℃，24～27h （三）发酵生产 1、培养基 （1）碳源 常用：淀粉（玉米淀粉、燕麦粉、土豆粉）、可溶性淀粉、葡萄糖、糖蜜、油脂。 控制：玉米淀粉酶解液。 （2）氮源 常用：花生饼粉、黄豆饼粉、棉籽饼粉、(NH4)2SO4、氨水、尿素等，很少用价格昂贵的蛋白胨。 影响因素：氨基酸能刺激金色链霉菌生产四环素或金霉素； 过量的氮源抑制四环素的合成。 控制：氨基酸浓度100～200mg/L。 （3）抑氯剂 影响因素：阻止金霉素的合成，促进四环素的合成，但浓度较大时对产生菌有毒性。 控制：抑氯剂与NaBr并用；抑氯剂加到种子罐。 （4）无机盐 影响因素：磷酸盐对菌体生长和抗生素的合成有很大影响； 镁盐、钙盐促进四环素生物合成； 铁离子及其他无机离子，抑制四环素的生物合成。 控制：无机磷含量110～120mg/ml；控制铁离子及其他无机离子浓度，加CaCO3。 2、发酵条件 （1）培养温度 前期温度高有利于菌丝繁殖， 中后期降温是为了减缓产生菌的代谢速度，使菌丝自溶期延迟。 控制：变温控制31℃-30℃-29℃ （2）溶氧 菌种对溶氧极为敏感。 （3）补料 ①C、N源 ②pH值 金色链霉菌生长，最适pH值6.0～6.8 合成四环素，最适pH值5.8～6.0 控制：发酵不同阶段，加入葡萄糖或淀粉和氨水控制所需pH值。 ③消泡剂 影响因素：油中酸价和过氧化物过多，影响四环素生物合成。 控制：油的质量 （4）发酵时间 通常为8d。 四、四环素的提取和精制 （一）发酵液的预处理 1、原理： （1）在pH=4.5～7.2，四环类抗生素难溶于水，小于4大于8易溶于水。 （2）黄血盐、硫酸锌和硼砂，能除去发酵液中的铁离子、蛋白质和其它多种离子色素。 2、方法： （1）酸化 加草酸使发酵液酸化到pH=1.6～1.9，四环素转入液体中。在低温、短时进行。 （能去除钙离子，析出的草酸钙能促使蛋白质凝固，提高过滤速度。草酸价格较贵和加速四环素的差向化