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农村散养鸡新城疫抗体水平的检测与分析 　　鸡新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病急、传播快、死亡率高，发病率可达90%。临床上常见呼吸困难，排水样或黄绿色粪便，产蛋鸡产蛋量急剧下降，软壳蛋、畸形蛋明显增多。鸡只接种新城疫疫苗后体内会产生特异性抗体，借助间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA），可对血清中新城疫抗体水平进行检测，有效评估鸡群的免疫效果。为摸清汾阳市散养鸡新城疫抗体水平，笔者于2013年5月对汾阳市3个乡镇散养鸡新城疫抗体进行了血清学检测，现报告如下： 　　一、材料与方法 　　1. 血样的采集 　　对汾阳市3个养殖集中乡镇散养鸡随机采血，每只翅下静脉采血2毫升，共采集血样178份，其中冀村75份，杏花46份，阳城57份。 　　2. 血样的处理 　　采集的血样倾斜静置1小时，待析出血清后，2000转/分钟离心8～10分钟，取上层血清待检。 　　3. 仪器与试剂 　　单道、多道微量移液器；吸头；D-9602酶标分析仪，北京普朗新技术有限公司生产；新城疫病毒抗体检测试剂盒，北京维德维康生物技术有限公司生产，批号为121202。 　　4. 试验方法与原理 　　①试验方法。间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA）。 　　②原理。特异的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯板上。在反应过程中，检测样本被加入反应孔中，样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应，在洗板的过程中不会被清洗掉，当添加酶标复合物时，这些酶标复合物就会与鸡血清的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。再加入底物显色，显色的深浅与样本所含NDV的抗体浓度成正比。 　　③操作步骤。第一步样本稀释，将被检血清用稀释液做1∶100稀释。第二步加样，阴性血清和阳性血清各占1孔做对照，其余孔加1∶100稀释的被检血清，每孔100微升，加样位置做好记录，反应板盖上膜，置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第三步加酶标抗体，每孔加酶标抗体液100微升，反应板盖上膜，置37℃环境下作用30分钟后洗涤3次。第四步加底物使用液，每孔100微升，置室温避光显色2～3分钟。第五步加终止液，每孔100微升，使其终止反应。 　　④结果判定。在酶标仪490纳米波长处，测定酶标板的每孔吸光值（P），除以同板标准阴性对照的吸光值（N），测得每份被检样品的P/N值。P/N≥2.5时，样品判定为阳性；P/N2.5时，样品判定为阴性；N≥0.3时，结果不准确，必须查找原因，重新测定。 　　二、结果分析 　　178份待检血清吸光值见表1、表2。H11孔为阴性血清吸光值，H12孔为阳性血清吸光值。冀村75份血清对应孔为表1的A行、B行、C行、D行、E行、F行和G1～G3；杏花46份血清对应孔为表1的G4～G12与H1～H10和表2的A行、B行、C1～C3；阳城57份血清对应孔为表2的C4～C12、D行、E行、F行、G行。冀村合格数62份，合格率82.7%；杏花合格数27份，合格率58.7%；阳城合格数51份，合格率89.5%。总的合格数140份，合格率78.7%，见表3。 　　三、讨论 　　我市要求新城疫免疫密度达到100%，从本次检测结果来看，冀村、阳城的新城疫免疫合格率达到了农业部的要求（70%以上），但值得注意的是杏花镇的新城疫合格率（58.7%）远低于农业部标准。笔者通过调查了解，分析主要原因如下： 　　1. 疫苗保存不当。部分养殖户为图省事，将油乳剂灭活苗、冻干苗都放在4℃冷藏箱中，导致冻干苗因储存温度过高而失效。 　　2. 饲养条件和饲料质量差。一些农村散养户的鸡舍通风不良、卫生条件差，鸡群长期处于应激状态，免疫力下降。有的饲料黄曲霉素超标、营养物质缺乏，影响新城疫抗体产生。 　　3. 防疫员责任心亟待加强。有的防疫员在接种疫苗时没有按照规定剂量免疫，有的过分追求防疫进度而忽视效果，有的嫌注射疫苗麻烦，而采用饮水免疫，这都造成新城疫抗体水平低下，必须加强防疫员的责任心。 　　（作者联系地址：山西省汾阳市动物疫病预防控制中心 邮编：032200） 4