SOPZL09QC08701药品包装容器(材料)细胞毒性检查标准操作规程微.docVIP

目的 规范药用包装容器(材料)细胞毒性试验的操作，保证检测有章可循。 范围 本程序适用于药用包装容器(材料)中细胞毒性试验的检验。 内容 3.1引用标准 国家食品药品监督管理局，国家药品包装容器（材料）方法标准 YB2015 3.2 简述 本法是将一定量的供试品溶液加入细胞培养液中，培养细胞，通过对细胞形态、增殖和抑制影响的观察，评价供试品对体外细胞的潜在毒性作用。 3.3 试验用细胞 推荐使用小鼠成纤维细胞（ L-929）。试验时采用传代48～72小时生长旺盛的细胞。 3.4 试验前的准备 与样品及细胞接触的所有器具均需无菌（必要时可采用湿热灭菌如115℃保持30分钟；干热灭菌如250℃保持30分钟或用180℃保持2小时）。 3.5 细胞悬液的制备 对已培养48～72小时小时生长旺盛的细胞消化混匀进行计数，将其配制成4×104个/ml的细胞悬液。 3.6 供试溶液的制备 将供试品用肥皂水清洗除去油污，再用纯化水冲洗干净，滤纸吸干后切成0.5cm×2cm条状，用湿热灭菌或紫外线照射消毒后，置玻璃器皿内。除另有规定外，按表1加入氯化钠注射液或无血清培养基作为浸提液，使浸提液浸没供试品；按表2选择浸提条件（若采用含血清培养基，应用37℃±1℃、24小时±2小时的条件）浸提，即得。 表1 供试品表面积或重量与浸提液的比例 供试品厚度（mm） 供试品表面积或重量与浸提液的比例 ≤0.5 6cm2/ml ＜0.5-1.0 3cm2/ml ＞1.0 1.25m2/ml 不规则形状 0.2g/ml 表2 浸提条件 浸提温度（℃） 浸提时间（小时） 37±1 24±2 37±1 72±2 50±2 72±2 70±2 24±2 3.7 第一法 相对增殖法 3.7.1阴性对照液 为不加供试品的细胞培养液。 3.7.2阳性对照液 6.3%苯酚的细胞培养液。 3.7.3检查法 3.7.3.1取培养瓶33只，分别加入细胞悬液1ml，细胞培养液4ml，置37℃±2℃，5%二氧化碳的条件下培养24小时。培养24小时后弃去原培养液。 3.7.3.2阴性对照组： 取13个培养瓶加入5ml阴性对照液；阳性对照组10个培养瓶加入5ml阳性对照液；试验组10个培养瓶加入5ml含50%供试液的细胞培养液。置37±1℃，（5±1）%CO2的条件下继续培养7天。 3.3.3 细胞形态学观察和计数：在更换细胞培养液的当天，取3瓶阴性对照组，并在更换后第2、4、7天，每组各取3瓶进行细胞形态观察和细胞计数。 3.3.4毒性评定 3.3.4.1细胞形态分析标准按下表规定。 程度 细 胞 形 态 无毒 细胞形态正常，贴壁生长良好，L-929细胞呈梭形或不规则三角形 轻微毒 细胞贴壁生长好，但可见少数细胞圆缩，偶见悬浮死细胞 中等毒 细胞贴壁生长不佳，细胞圆缩较多，达1/3以上，见悬浮死细胞 严重毒 细胞基本上不贴壁，90%以上呈悬浮细胞 3.3.4.2细胞相对增殖度分级标准按下表规定： 分级 相对增殖度 0 ≥100 1 75～99 2 50～74 3 25～49 4 1～24 5 0 3.3.4.3 根据各组细胞浓度按下式计算细胞相对增殖度（RGR）： 供试品组（或阳性对照组）×细胞浓度平均值 RGR= ──────────────────── ×100% 阴性对照组细胞浓度平均值 3.3.5结果评价 3.3.5.1试验组相对增殖度（以第7天的细胞浓度计算）为0或1级判为合格。 3.3.5.2试验组相对增殖度为2级，应结合形态综合评价，轻微毒或无毒的判为合格。 3.3.5.3 试验组相对增殖度为3～5级判为不合格。 附件 无 培训 培训部门：质量部 培训对象：全体人员 变更历史 变更前版本号 变更后版本号 变更原因 变更批准日期 SOP·ZL·09·QC·087·01 SOP·ZL·09·QC·087·02 执行2015年版药典 2015年10月30日 药品包装容器（材料）细胞毒性检查标准操作规程 文件编码：SOP·ZL·09·QC·087·02 第 3 页 共 3 页