PCR擴增DNA片段及产物检测的方法20111123.docVIP

聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段 一、实验目的 1．学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法。 2．理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性。 3．了解引物设计的一般要求。 二、实验原理 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93-95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～65℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。??? PCR反应系统的组成：引物、寡核苷酸、Taq DNA聚合酶、模板DNA、缓冲液。 三、试剂与器材 1、试剂10×EX Taq Buffer (Mg2+ plus) ；dNTP Mixture (各2.5 mM) TaKa