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SOX4單克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用
PAGE 258 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2
眉题 PAGE 2
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生物工程学报 Chin J Biotech 2009, February 25; 25(2): 257-262
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ ? 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
医学与免疫生物技术
医学与免疫生物技术
Received: August 27, 2008; Accepted: December 3, 2008
Supported by: National High Technology Research and Development Program (863 Program) (No. 2006AA02A245), National Natural Science Foundation of China (No., and Natural Science Foundation of Beijing (No. 7082070).
Corresponding author: Ning Guo. Tel: +86-10 E-mail: ningguo@
国家高技术研究与发展项目(863计划) (No. 2006AA02A245), 国家自然科学基金项目(No., 北京市自然科学基金项目(No. 7082070)资助。
SOX4单克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用
于鸣1, 穆蕊2, 吕明1, 李爱玲2, 郭宁1
1 军事医学科学院基础医学研究所 细胞免疫学研究室, 北京 100850 2 国家生物医学分析中心, 北京 100850
摘 要: 应用分子生物学技术, 构建了含SOX4编码序列的原核表达载体, 在大肠杆菌 DH5?中获得了GST-SOX4融合蛋白的可溶性表达。应用谷胱甘肽-Sepharose 4B对重组蛋白进行了纯化, 利用纯化的融合蛋白免疫小鼠, 制备了可特异性识别SOX4的单克隆抗体。通过间接 ELISA 法鉴定了抗体的效价为1 × 10?5, Western blotting 分析证实了抗体的特异性。结果显示, 该抗体可识别细胞内外源性过表达及内源性的SOX4蛋白。在培养细胞系、小鼠不同组织中, SOX4蛋白的表达存在显著的差异。本研究制备的SOX4单克隆抗体具有良好的特异性, 为进一步研究SOX4在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。
关键词: SOX4, 融合蛋白, 单克隆抗体, 肿瘤发生
Preparation of the monoclonal antibody against SOX4 protein and detection of SOX4 expression level in different tumor cell lines
Ming Yu1, Rui Mu2, Ming Lü1, Ailing Li2, and Ning Guo1
1 Department of Molecular Immunology, Institute of Basic Medical Sciences, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China
2 National Center of Biomedical Analysis, Beijing 100850, China
Abstract: In the present study, we constructed a prokaryotic expression vector containing SOX4 protein encoding sequences. The GST-SOX4 soluble protein was expressed in Escherichia coli DH5? and purified by gluta
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