高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸辩析.pptVIP

林薇薇 《卫生化学》实验 中山大学公共卫生学院 高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸 食品添加剂——苯甲酸 食品添加剂是指为改善食品色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入到食品中的化学合成物质或天然物质 苯甲酸是我国目前最常用的食品防腐剂，主要作用是防止由微生物活动而引起的食品变质 化学方程式C6H5COOH 溶解性：微溶于水，乙醇，乙醚 酸性：弱酸 俗名：?安息香酸? 食品添加剂——苯甲酸 中国（食品添加剂使用卫生标准》（GB2760－1996） 碳酸饮料，最大使用量为 0.2g/kg； 低盐酱菜、酱类、蜜饯，0.5g/kg； 葡萄酒、果酒、软糖，0.8g/kg； 苯甲酸和苯甲酸钠同时使用时，以苯甲酸计不得超过最大使用量 中国 日本 美国 欧盟 调味糖浆 1.0g/kg 0.6g/kg 500mg/kg 500mg/kg 酱油 1.0g/kg 0.6g/kg 无酒精饮料 1.0g/kg 0.6g/kg 150mg/kg 150mg/kg HPLC分析模式选择 样品种类 模式 固定相 流动相 Neutrals中性 Weak Acids弱酸 Weak Bases弱碱 Reversed Phase 反相 C18, C8, C4 cyano, amino Water/Organic Modifiers Ionics, Bases, Acids Ion Pair C-18, C-8 Water/Organic Ion-Pair Reagent Compounds not soluble in water Normal Phase Silica, Amino, Cyano, Diol Organics Ionics Inorganic Ions Ion Exchange Anion or Cation Exchange Resin Aqueous/Buffer Counter Ion High Molecular Weight Compounds Polymers Size Exclusion Polystyrene Silica Gel Filtration- Aqueous Gel Permeation- Organic 泵 进样器 检测器 馏分收集器 流动相 HPLC高压输液系统不包括： A. 贮液器 B. 高压输液泵 C. 六通阀 D. 梯度洗脱装置 六个部分 1. 高压输液系统; 2. 进样系统 3. 分离系统; 4. 检测系统; 5. 数据记录与处理系统; 6. 辅助装置 C8属于正相化学键合固定相，C18属于反相化学键合固定相？ HPLC通过改变流动相的组成和极性，可调整出峰时间并改善分离度？ 紫外-可见检测器利用物质吸收受紫外-可见光辐射的性质来进行检测？ 实验目的 熟悉HPLC操作条件的选择，以达到化合物的良好分离效果 掌握HPLC测定汽水中苯甲酸的方法 实验原理 样品超声去CO2和乙醇，调pH至中性，过滤后进HPLC进行分析。使用C18柱作为分析柱，甲醇及乙酸铵溶液作为流动相，分离汽水中的苯甲酸。利用紫外检测器在230nm波长处进行检验，以色谱峰的保留时间定性，峰面积定量。 仪器及试剂 高效液相色谱仪(Waters2695)+紫外检测器(Waters2998) 千分之一电子天枰（型号） 高速离心机（型号） 甲醇（优级纯） （1+1）氨水 0.02mol/L乙酸铵溶液 1mg/ml苯甲酸标准储备液 0.1mg/ml苯甲酸标准使用液 Waters 2695 流动相 紫外检测器 柱温箱 可视化面板 Waters2695 自动进样器 运行样品 数据处理 实验步骤 1. 样品处理 称量： ①打开天平侧门，放入小烧杯，读书稳定后，TARE/POWER键归零 ②用吸管吸取汽水约10g于小烧杯中，读书稳定后，记录读数 搅拌除去二氧化碳 使用氨水（约1～2滴，1.5滴为佳）调pH至约7，使用pH试纸判定 加超纯水定容至25ml 8000转/min离心5min 取上清液转移至HPLC进样瓶 TARE POWER 实验步骤 2. 流动相配置 甲醇、0.02mol/L乙酸铵溶液；流动相使用前用0.5μm滤膜过滤后，超声脱气 3. HPLC条件设置 C18色谱柱 甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液=10：90 流速：1ml/min 进样量：20 μL 紫外检测器波长：230nm 实验步骤 4. 标准样测定及标准曲线绘制 分别吸取苯甲酸标准使用液（0.1mg/ml）2，4，6，8，10ml于10ml比色管中，用超纯水定容至刻度，混匀。过滤后分别吸取20 μL进样，测定不同浓度标准溶液的峰面积。以苯甲酸标准溶液浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 5. 样品测定 各组将HPLC进样瓶放入HPLC样品盘