紫色作物花色苷的分离鉴定及抗病毒机理的初探硕士论文.doc

分类号： 密 级：非涉密 学 号：2010106005 单位代码：10759 石河子大学 硕 士 学 位 论 文 紫色作物花色苷的分离鉴定及 抗病毒机理的初探  学 位 申 请 人 导 教 师 申请学位门类级别 学 科 、 专 业 名 称 研 究 方 向 所 在 学 院  雷 用 东 童军茂 教授 赵晓燕 研究员 张莉 副研究员 农学 硕士 农产品加工及贮藏工程 果蔬贮藏与加工 食 品 学 院  中国〃新疆〃石河子 2013 年 06 月  Identification and preliminary explored their Anti-virus Mechanism  of Anthocyanins from Purple Crop A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture (Processing and Storage of Agricultural Products) By Lei Yong-dong (Processing and Storage of Fruits and Vegetables) Dissertation Supervisor: Prof. Tong Jun-mao ,Zhao Xiao-yan and Zhang Li June, 2013  摘 要 花色苷作为水溶性色素广泛存在于紫色作物中，具体抗氧化、清除自由基、抗癌等重要生物 活性，而其具有抗病毒功效未知，且相关研究较少。因此，本文尝试在体外研究紫色作物花色苷 抗急性猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和慢性肿瘤禽白血病 A 亚群病毒（ALV-A）的作用，并在 ALV-A 介导鸡成纤维细胞（DF-1）的 NFκB 信号传导途径上，探索花色苷抗病毒的机理，对家禽 病毒的防治具有重要意义。 本研究以紫玉米苞叶为原料，通过乙醇提取法，获得紫玉米花色苷提取物。另外选取紫甘蓝、 黑豆皮、黑加仑、接骨木、笃斯越桔、紫甘薯和心里美萝卜七种花色苷提取物为研究对象，采用 pH 示差法、HPLC-MS 方法测定花色苷的纯度和结构。基于体外细胞模型，TGEV 和 ALV-A 分别 诱导 ST 和 DF-1 细胞病变，采用 MTT 和显微镜观察法测定紫色作物花色苷对两种病毒的抑制效 果。同时，以紫玉米花色苷为例，依据 NFκB 信号传导途径的理论基础，采用 Western Blot、EMSA 等方法，在核酸和蛋白水平上探讨花色苷对 ALV-A 感染 DF-1 细胞后的 NFκB p50/p65 活性的影响。 得出以下结论： （1）本文从紫玉米苞叶中提取到纯度为 11.54%的花色苷，检测八种紫色作物中的主要花色 苷组分研究显示：紫玉米、紫甘蓝、黑豆皮、黑加仑、接骨木、笃斯越桔的花色苷基本单元糖苷 为矢车菊色素，而紫甘薯主要以芍药色素为主，心里美萝卜主要以天竺葵色素为主。 （2）紫色作物花色苷在安全质量浓度范围内，抗 TGEV 病毒效果排序为：黑加仑＞黑豆皮＞ 接骨木＞紫甘薯=紫玉米＞紫甘蓝＝心里美萝卜＞笃斯越桔。单体花色苷抗 TGEV 效果为 Cy-3-glc ＞Pg-3-glc。这些研究数据可为花色苷抗病毒效果提供明显直观的研究模型。 （3）紫色作物花色苷在安全质量浓度范围内，抗 ALV-A 病毒效果排序为：黑加仑＞黑豆皮 ＝紫玉米＞紫甘薯＞接骨木＞心里美萝卜＝笃斯越桔＞紫甘蓝。单体花色苷抗 ALV-A 效果： Pn-3-glc＞Cy-3-glc＞Pg-3-glc。这些研究数据可为探讨花色苷抗病毒效果提供肿瘤模型。 （4）建立的肿瘤病毒模型显示，紫玉米花色苷可有效抑制 ALV-A 介导 DF-1 细胞的 NFκB p50/p65 活性，揭示花色苷抗 ALV-A 病毒机理。 关键词：紫色作物花色苷；猪传染性胃肠炎病毒；鸡禽白血病病毒 A 亚群；核转录因子 κB；信号 途径 I  Abstract Anthocyanins as the water-soluble pigments widely exist in the purple crops. The most important biol