升麻炮制前后有效成分的比較研究.docVIP

升麻炮制前后有效成分的比较研究 周保琪 2009级中药传承班 河南中医学院 河南郑州 450008 [摘要] 目的:建立测定升麻中有效成分阿魏酸和异阿魏酸含量的方法,并比较炮制前后阿魏酸、异阿魏酸和272脱氧升麻亭的含量差异。方法:阿魏酸和异阿魏酸测定方法:色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150 mm, 5μm) ,乙腈2水2乙酸(15 ∶85 ∶0. 25)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C,紫外检测波长320 nm; 272脱氧升麻亭测定方法:色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150 mm, 5μm) ,乙腈2水2乙酸(40 ∶60 ∶1)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C,示差检测器。结果:测定阿魏酸线性范围( r) ,加样回收率为(RSD ) ;异阿魏酸线性范围( r ) ,加样回收率为 (RSD ) 。结论该方法简便、快捷、准确,重复性好,适合于升麻药材和饮片的质量控制。 [关键词] 升麻; 阿魏酸; 异阿魏酸; 272脱氧升麻亭; 炮制 升麻为常用中药,具有发表透疹、清热解毒、升举阳气等功能, 2010年版《中国药典》收载其原植物有大三叶升麻Cim icifuga heracleifolia Kom. 、兴安升麻C. dahuricaMaxim. 和升麻C. foetida L. 3种。升麻根茎主要含三萜皂苷、有机酸和色原酮类化合物。一般认为升麻有机酸是其有效成分,并以所含的阿魏酸、异阿魏酸为指标控制质量[ 1～4 ] 。近年来研究发现升麻所含的环菠萝蜜烷型三萜皂苷具有抗肿瘤、抑制核苷运转、调节内分泌等多种生理活性,也是其活性成分之一。升麻的临床应用以生片和蜜制片为主,有关升麻炮制研究非常少,本实验将以RP2HPLC法对升麻炮制前后有效成分阿魏酸、异阿魏酸和三萜皂苷272脱氧升麻亭(272deoxyactein)的含量进行测定,并探讨升麻炮制前后有效成分变化规律。 1　升麻炮制前后阿魏酸和异阿魏酸的含量测定 1. 1　仪器与试药 日本Jasco 系列HPLC 色谱仪: Jasco pump21580, Jasco UV21575 检测器, Jasco 工作站; 湘仪天平厂生产TG332A微量分析天平,昆山市超声仪器有限公司生产KQ2250B型超声波振动仪。乙腈色谱纯( Fisher公司出品) ,重蒸馏水自制,阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号077329910) ,异阿魏酸和272脱氧升麻亭为本课题组分离和结构鉴定, 经HPLC 法检测含量达98 。 1. 2　实验方法 1. 2. 1　色谱条件 色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150mm, 5μm) ;乙腈2水2乙酸(15 ∶85 ∶0. 25)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C, 紫外检测波长320nm,进样量20μL,外标法定量。理论塔板数按阿酸峰计算,应不低于4 000。 1. 2. 2　溶液制备 对照品溶液制备　准确称取干燥至恒重的对照品阿魏酸2. 12 mg置2 mL 量瓶中,用80 甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得1. 06 mg/mL 阿魏酸贮备溶液;另再准确称取干燥至恒重的对照品异阿魏酸2. 08 mg置2 mL 量瓶中,用80 甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得1. 04 mg/mL 异阿魏酸贮备溶液。供试品溶液的制备　精密称取干燥的升麻样品粉末0. 5 g,置三角瓶中,加入50 mL甲醇,摇匀,于80 °C水浴上回流提取40min,过滤,滤渣用20 mL甲醇洗涤3次,合并滤液,回收甲醇,提取物用80甲醇定容至2 mL量瓶,摇匀,即得。 1. 2. 3　测定法 精密吸取阿魏酸和异阿魏酸贮备液80 μL 和160μL置2 mL量瓶,用80 甲醇定容至刻度,即为阿魏酸和异阿魏酸稀释溶液。用微量进样器精密吸取供试品溶液和对照品稀释溶液各20 μL 注入HPLC仪,外标法定量，得到对照品、样品HPLC色谱图,测定结果见表1。 表1　升麻炮制前后有效成分含量测定 药名 产地 类别 阿魏酸含量 异阿魏酸含量 27脱氧升麻亭含量 （㎎／g） (㎎／g） (㎎／g） 升 甘肃 生药 切片