各級分蛋白含量的计算1.docVIP

课题名称：生物化学 实验名称：酵母蔗糖酶的提取及 其性质的研究 专业班级：2010级生物工程（2）班 姓名：陈木兰 日期：2011年12月15日——17日 实验数据记录及处理 各级分蛋白含量的计算:根绝不同浓度（即0.1，0.3，0.5，0.7，0.9）有在分光仪上的读数得到的曲线如下，将测出的蛋白质含量的分光仪读数代入曲线方程即可算出蛋白质浓度。 级分 粗级分1 热级分2 醇级分3 柱级分4 A280 0.416 0.232 0.404 0.176 稀释倍数 100 100 100 100 蛋白质浓度（mol\l) 1.55 0.86 1.51 0.66 校正体积计算如下： 级分 记录体积ml 核正体积计算 取样体积ml 校正后体积ml 1 13.5 13.5 1 13.5 2 12.3 12.3*(13.5/12.5) 1 13.28 3 8.4 8.4*(13.5/12.5)*(12.3/11.3) 1 9.88 4 6.9 6.9*(13.5/12.5)*(12.3/11.3)*(8.4/7.4) 1 9.21 离子交换层析洗头洗脱液浓度曲线如下： 尿糖试纸侧酶活性实验结果如下 试管I 试管II ++ ++++ 由此可见，试管 II的酶活性较高，量的体积为6.9ml。 各级分得旋光值a及转化率（%） 管数 1 2 3 4 酶液ml 0.5 0.5 0.5 0.5 乙酸缓冲液（0.2mol/l pH=4.9） 1.5 1.5 1.5 1.5 H2O(ml) 5 5 5 5 蔗糖0.05M（ml) 3 3 3 3 旋光值a 0.076 0.15 0.093 0.28 转化率（%） 66.69 59.91 65.13 48.02 6.酶纯化表如下： 级分 记录体积ml 校正后体积ml 蛋白质（mgml) 总蛋白质（mg) Units/ml 总Units 比活Units/mg 纯化倍数 回收率% Ⅰ 13.5 13.5 17.05 230.2 103.37 1396 6.11 1 100 Ⅱ 12.3 13.28 9.46 125.6 51.52 648.19 5.45 2.04 54.56 Ⅲ 8.4 9.88 19.54 164.11 98.35 971.2 5.92 0.67 71.29 Ⅳ 6.9 9.21 9.67 66.86 31.96 292 4.37 3.33 29.04 结果讨论及实验心得： 误差分析： 用PH试纸测PH值时，与标准对比颜色有点儿不一致。 测体积可能出现读数误差。 杂质含量过高，造成有定误差。 方法改进： 1)实验前，先将酵母浸泡几个小时，以达到研磨充分的目的。 2)第一次沉淀后取出中间清液，先对杂质进行处理，再做下一步。 实验心得： 该实验属于大实验，为8人一小组。整个实验时间较长，步步紧凑，操作过程要小心谨慎：认真研磨酵母，了解离心机及其他机器的使用（减小误差），读数及量体积要注意等。实验还要全体小组人员的默契配合才能成功。