實验一显微镜使用及植物有丝分裂的观察.docVIP

徐 州 工 程 学 院 教 案 2008 年至 2009 年 第 一 学期 第 3 周 实验名称：光学显微镜的结构、植物细胞有丝分裂的制片和观察 一、目的与要求 1、掌握光学显微镜的构造及使用方法。 2、掌握植物根尖细胞有丝分裂制片技术。 3、掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。 二、实验原理 有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。 三、实验材料 洋葱（Allium cepa, 2n=16）根尖组织 四、实验仪器 显微镜、分析天平、酒精灯、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、胶水、棕色瓶。 五、实验试剂 1、卡诺固定液：冰醋酸:无水酒精=1:3（体积比） 2、染色液： （1）丙酸－铁矾苏木精 　 贮存组：A液：苏木精2克，溶于100ml 50％丙酸， 　　　　　 B液：铁钾矾0.5克溶于100ml 50％丙酸。 　 染色液：A液和B液等量混合，每5ml的A液和B液的混合液中加入2克水合三氯乙醛，充分溶解摇匀，存放一天后使用。贮存液可较长久保存，染色液只能保存一个月，在两周内使用效果最好。 3、铁矾［铁钾矾KFe(SO4)2?12H2O或铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O］、1N盐酸、50％丙酸 贮存组：A液：苏木精2克，溶于100ml 50％丙酸， 　　　　　 B液：铁钾矾0.5克溶于100ml 50％丙酸。 染色液：A液和B液等量混合，每5ml的A液和B液的混合液中加入2克水合三氯乙醛，充分溶解摇匀，存放一天后使用。贮存液可较长久保存，染色液只能保存一个月，在两周内使用效果最好。 3、铁矾［铁钾矾KFe(SO4)2?12H2O或铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O］、1N盐酸、50％丙酸 六、实验步骤 （一）材料准备 通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20~25℃光照条件下培养2~3天，待根长1~2cm （二）预处理 为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，将根尖浸在蒸馏水中于在1~4℃ （三）固定 用蒸馏水洗净材料，再用卡诺固定液（用量应为材料体积的15倍以上）室温下固定30~60分钟。固定的材料如暂不制片，可经90％酒精→80％酒精→70％酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70％酒精内放入0~4℃ （四）解离 根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。 取材料的根尖，在生长点处切取1毫米左右（一般一个根尖可取4~5段），放入1N HCl酸解10分钟左右，取出，用水漂洗三遍。 （六）观察 制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找到具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。 （五）制片 选取已处理过的根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，使根尖压成一簿层，然后将两载玻片分开，各滴一小滴染色液进行染色，稍等片刻，取一盖玻片，盖玻片一边靠在离材料不远的载玻片上，左手握镊子顶着盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片徐徐放下，若染色液不能布满盖玻片时，可在盖玻片边缘稍加染色液，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制好的片子若不能及时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住盖玻片四周。 （六）观察 制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找到具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。 七、显微镜使用注意事项 1．取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，严禁单手提镜，勿使镜体倾斜，防止目镜从镜简中滑出或碰撞显微镜。 2.注意姿势。将显微镜平稳地放在自己左侧的适当地方，镜臂向着自己，镜检者姿势要端正。一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录。两眼必须同时睁开，以减少疲劳。 3.将镜台向上调节时，须从侧面观察，以防压碎标本玻片或损坏物镜镜头。 4．一般情况