實验五影响酶活力的因素.docVIP

实验10 影响酶活力的因素——正交实验法 （碘量法测定酶活力） 四个班，每班分16组 两个同学一组 目的要求：初步掌握正交实验设计法（简称正交法）的使用，运用正交法测定底物浓度、温度和pH这三种因素对酶活力的影响。 实验原理： 酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验，计算和分析实验结果。这样就能通过少量实验取得较好的效果。实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法，目前已广泛用于农业生产和科学实验中。 本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。 酶活力用硫代硫酸钠滴定法测定。过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵做催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。其反应为： H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO4+2H2O I2+Na2S2O4→2NaI+Na2S4O6 反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。 实验器材： 试管 15毫升试管 9*16=144支 吸管1毫升 2*16=32支 吸管5毫升 2*16=32支 吸耳球 16个 漏斗 1个 研钵（或者搅碎机） 1个（1台） 恒温水浴锅 3台 铁架台 16个 蝴蝶夹 16个 酸碱两用滴定管 16个 100毫升的三角烧瓶 3*16=48个 烧杯500毫升 18个（装好水放到恒温水浴锅里） 实验所需药品： 1. 0.01 mol/L 的过氧化氢溶液 每组消耗50毫升，每班需16 1.1毫升过氧化氢溶液，用蒸馏水定容至1000毫升。（用带盖白色试剂瓶分装10瓶。分装1000毫升即可，其余3000用白色大试剂瓶装好备用） 2. 1.8 mol/L 的硫酸溶液 （每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升）共配4000毫升 95毫升浓硫酸，用蒸馏水定容至1000毫升。（用带塞白色试剂瓶分装10瓶。分装1000毫升即可，其余备用） 3. 10%钼酸铵溶液 (每组需30滴，每班需16ⅹ30=480滴)共配500毫升 20克钼酸铵，少量蒸馏水溶解，用蒸馏水定容至200毫升（用带胶头滴管的白色试剂瓶分装10瓶。） 4. 0.02 mol/L 硫代硫酸钠溶液 （每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升，配置6000毫升） 4.97克硫代硫酸钠溶解于少量蒸馏水，蒸馏水定容至1000毫升。（用带胶头滴管的白色150毫升试剂瓶分装10瓶，分装1000毫升即可，其余备用） 5. 1%的淀粉溶液 （每组需50滴，每班共需 16ⅹ50=800滴，每班需200毫升，实验临用前配置） 2克淀粉，加入50毫升开水完全溶解，后用蒸馏水定容至200毫升。（用带胶头滴管的白色试剂瓶分装6瓶） 6. 20%的碘化钾溶液 （每组需12毫升，每班共需16ⅹ12=192毫升）共配1000毫升 200克碘化钾溶解于少量蒸馏水中，蒸馏水定容至1000毫升。（用棕色容量瓶配，用带塞棕色50毫升试剂瓶分装，分装10瓶） 7. 巴比妥钠---盐酸缓冲液 A液：0.04 mol/L 巴比妥钠盐 8.25克蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至1000毫升 B液：0.2 mol/L 16.5毫升浓盐酸加蒸馏水定容至1000毫升 pH 5 巴比妥钠--盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制 A液1000毫升 +B液200毫升 （用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH） pH 7 巴比妥钠---盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制 A液1000毫升 +B液178毫升 （用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH） pH 9 巴比妥钠---盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制 A液1000毫升 +B液165毫升 （用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH） 实验步骤： 1. 酶液提取：称取新鲜小麦叶片1.25克，剪碎置研钵中，加入约0.5克碳酸钙和10毫升水研磨成匀浆，用漏斗移入25