盐酸小檗碱片微物限度检查法验证方案.docVIP

文件名称 盐酸小檗碱片微生物限度检查法方法验证方案 文件编号 PA02-JF-C07 起 草 人 起草日期 年 月 日 审 核 人 审核日期 年 月 日 批 准 人 批准日期 年 月 日 执行日期 年 月 日 颁发部门 版本号：1 印数： 分发部门 分发数量 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 验证小组人员及责任： 1.1 验证小组人员： 小组职务 姓名 组 长 组 员 组 员 组 员 1.2 责任： 验证小组组长负责验证方案起草和编写，组织验证全过程的实施，提出验证报告。 验证小组组员分别负责落实方案实施中各部分验证的具体工作。 验证目的及标准来源： 2.1 验证目的：盐酸小檗碱片微生物限度试验采用薄膜过滤法进行检查。验证所使用的微孔滤膜能有效截留各类微生物、检验方法能消除盐酸小檗碱对各类微生物的抑制作用。 2.2. 标准来源：《中国药典》2005版二部 《中国药品检验标准操作规程》2005年版 3. 设备、仪器 3.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。 3.1.1 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。 3.1.2 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。 3.1.3 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。 3.1.4 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。 3.2 仪器 3.2.1 恒温培养箱（30～350C）3.2.2 玻璃器皿 烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm适宜疏松的棉花，置牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞或棉花塞。玻璃器皿均于高压蒸汽1210C灭菌30min，烘干或1600C干热灭菌2h，备用。 培养基及其制备方法 4.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基32g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。 4.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。 4.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基33.6g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。 注：培养基（生物试剂）由中国药品生物制品检定所生产。 5 验证用菌种 验证用菌株 大肠埃希菌（Escherichia coli）﹝CMCC(B)44102﹞，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）﹝CMCC(B)26003﹞，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）﹝CMCC(B)63501﹞，白色念珠菌（Candida albicans）﹝CMCC(F)98001﹞，黑曲霉（Aspergillus niger）﹝CMCC(F)98003﹞。 验证用微生物的稀释度和接种量 菌 种 名 称 浓度/CFU·ml-1 稀释级 接种量/ml 大肠埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B)44102 金黄色葡萄球（Staphylococcus aureus）CMCC(B)26003 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC(B)63501 白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(F)98001 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC(F)98003 5.9×107 6.3×108 6.7×109 6.2×108 7.6×108 10-6 10-7 10-8 10-7 10-7 1 1 1 1 1 6 试液 6.1 靛基质试液 6.1.1 配制：取对二甲氨基苯甲醛10.0g，加入戊醇150ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸50ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶