微生物顯微镜直接计数法和死活细胞的鉴定.docVIP

实验四 微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定 以及四大类微生物菌落形态的比较和识别 ? 微生物显微镜直接计数法 实验目的 1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 2、学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。 实验原理 酵母菌显微直接计数—血球计数板 实验材料 显微镜、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸. 实验步骤 1、取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 2、取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3、用10×(40x)镜观察并将计数室移至视野中央。 4、在10×(40x)镜下计数：计数5个中格的平均值，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半。 实验结果 将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数。 各中格中菌数 T 二室平均值 个/ml 1 2 3 4 5 第一室 第二室 问题与讨论 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？有何改进方法？ ? 酵母菌死活细胞的鉴定 一、实验原理 美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。 二、实验材料 酵母菌悬液、 0.1 ％吕氏碱性美蓝染色液 显微镜、载玻片、盖玻片。 三、实验步骤 美蓝镜片的观察 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用吸取计数时酵母菌样品液放在染液中，混合均匀。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 3）将制片放置约1min后镜检，低倍镜到高倍镜观察，根据颜色来区别死活细胞。 注意事项 1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。 2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 四、实验结果 将观察结果绘制成图，并标明死细胞和活细胞，计算活细胞所占比例。结合显微镜直接计数法，数出样品中的活细胞数。 ? 四大类微生物菌落形态的比较和识别 一、实验目的 1、熟悉四大类微生物菌落的主要特征 2、掌握识别四大类微生物菌落形态的依据和要点，并应用于识别未知菌落 实验原理 掌握识别四大类微生物菌落形态的要点对于从事菌种的筛选、杂菌的识别和菌种鉴定等项工作都有重要意义。 菌落是由某一微生物的少数细胞或孢子在固体培养基表面繁殖后所形成的子细胞群体，因此，菌落形态在一定程度上是个体细胞形态和结构在宏观上的反映。由于每一大类微生物都有其独特的细胞形态，因而其菌落形态特征也各异。在四大类微生物的菌落中，细菌和酵母菌的形态较接近，放线菌和霉菌形态较相似。 细菌和酵母菌的异同 细菌和多数酵母菌都是单细胞微生物。菌落中各细胞间都充满毛细管水、养料和某些代谢产物，因此，细菌和酵母菌的菌落形态具有尖似的特征，如湿润、较光滑、较透明、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等。它们之间的区别如下： 细菌：由于细胞小，故形成的菌落也较小，较薄、较透明且有“细腻”感。不同的细菌会产生不同的色素，因此常会出现五颜六色的菌落。此外，有些细菌具有特殊的细胞结构，因此，在菌落形态上也有所反映，如无鞭毛不能运动的细菌其菌落外形较圆而凸起；有鞭毛能运动的细菌其菌落往往大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边缘从不规则、缺刻状直至出现迁居性的菌落，例如变形杆菌属和菌种。具有荚膜的细菌其菌落更粘稠、光滑、透明。荚膜较厚的细菌其菌落甚至呈透明的水珠状。有芽孢的细菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皱褶等特征。细菌还常因分解含氮有机物而产生臭味，这也有助于菌落的识别。 酵母菌：由于细胞较大（直径约比细菌大10倍）且不能运动，故其菌落一般比细菌大、厚而且透明度较差。酵母菌产生色素较为单一，通常呈矿蜡色，少数为橙红色，个别是黑色。但也有例外，如假丝酵母因形成籍节状的假菌丝，故细胞易向外圈蔓延，造成菌落大而扁平和边缘不整齐等特有形态。酵母菌因普遍能发酵含碳有机物而产生醇类，故其菌落常伴有酒香味。 放线菌和霉菌的异同 放线菌和霉菌的细胞都是丝状的，当生长于固体培养基上时有营养菌丝（或基内菌丝）和气生菌丝的分化。气生菌丝向空间生长，菌丝之间无毛细管水，因此菌落外观呈干燥、不透明的丝状、绒毛状或皮革状等特征。由于营养菌丝伸入