海鞘皮囊的主要化學成分季节性变化的分析研究.docVIP

海鞘皮囊的主要化学成分季节性变化的分析研究 摘要 通过氨基酸自动分析仪以外标法，测定不同时期海鞘的游离氨基酸含量。通过薄层色谱法，测定不同时期海鞘中牛磺酸的含量。结果发现海鞘中游离氨基酸含量和牛磺酸含量均会随季节发生变化，且发现海鞘中含有的游离氨基酸含量以及牛磺酸含量在8月份较高。 关键词 海鞘 季节性 游离氨基酸 牛磺酸 背景 氨基酸是一种含有氨基和羧基的一类有机化合物的统称，生物功能大分子蛋白质的基本组成单位。氨基酸能在植物或动物组织中合成，可由蛋白质水解得到，在组织的代谢、生长、维护和修复过程中起重要作用。作为重要营养素，氨基酸可从食物中获取。 牛磺酸又名牛胆酸或牛胆碱（Taurine），1827年作为牛胆汁的一个组成成分从动物组织中首次分离出来，由此而得名。游离牛磺酸的化学名为α-氨基乙基磺酸，是一种含硫β-氨基酸。牛磺酸具有保肝利胆、抗惊厥、抗心律失常，调节渗透压、降血压、治疗动脉硬化等多种生理作用，尤其是对婴幼儿的脑、神经、内脏、视网膜、内分泌机能等的发育以及对钙、脂肪和维生素的吸收都具有十分重要的作用。 一、游离氨基酸含量的测定 1 材料与方法 1.1 实验材料与仪器 不同季节海鞘皮囊提取液 试验仪器：真空泵、 恒温干燥箱、 水解管（耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管,体积20～30ml.用去离子水冲洗干净并烘干）、 真空干燥器（温度可调节）、 氨基酸自动分析仪试剂：全部试剂除注明外均为分析纯,实验用水为去离子水. 浓盐酸：优级纯6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成. 苯酚：需重蒸馏. 混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L缓冲液： pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到 1000ml,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3. pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0. pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4. 茚三酮溶液 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g,加入冰乙酸（优级纯）279ml,加水稀释到1000ml,用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2. 茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解. 高纯氮气：纯度99.99%. 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 1.2 实验方法 （1）样品处理样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存,分析用时将其解冻后使用.（2）称样准确称取一定量样品,精确到0.0001g.均匀性好的样品,使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再稀释.将称好的样品防于水解管中.（3） 水解在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定）,含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸,加入新蒸馏的苯酚3～4滴,再将水解管放入冷冻剂中,冷冻3～5min,再接到真空泵的抽气管上,抽真空（接近0psi）,然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气,重复三次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内,水解22h后,取出冷却. 打开水解管,将水解液过滤后,用去离子水多次冲洗水解管,将水解液全部转移到50ml容量瓶内,用去离子水定容.吸取滤液1ml于5ml容量瓶内,用真空干燥器在40～50℃干燥,残留物用1～2ml水溶解,再干燥,反复进行两次,最后蒸干,用1mlpH2.2的缓冲液溶解,供仪器测定用.（4） 测定准确吸取0.200ml混合氨基酸标准,用pH2.2的缓冲液稀释到5ml,此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL,作为上机测定用的氨基酸标准,用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量. 二、牛磺酸含量测定 1 材料与方法 1.1 实验材料与仪器 不同季节海鞘皮囊提取液 仪器 1.5cm×30cm层析柱；蒸发皿1.5cm×20cm薄层板；10μl微量注射器；展开槽；玻璃喷雾器；电吹风。1.2 试剂 以下试剂均为分析纯。盐酸；氢氧化钠；无水乙醇；正丙醇；冰乙醇；正丁醇；