分子生物学第五 分子生物学的常规技术(六).pptVIP

第五章 分子生物学的常规技术（六）——DNA文库的构建 和目的基因的筛选 基因文库： 也称DNA文库，是指某一生物体全部或部分基因的集合。 某个生物的基因组DNA或cDNA片段与适当的载体在体外重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落(或噬菌体)，所有菌落或噬菌体的集合即为该生物的基因文库(gene library)。 基因文库: 外源DNA片段 载体 宿主 等3个部分组成。 构建基因文库的基本程序： ①提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA； ②DNA片段或cDNA与经特殊处理的载体连接形成重组DNA； ③重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌； ④阳性重组菌落或噬菌斑的选择。 基因文库(外源DNA片段的来源)分为： 基因组DNA文库(genomic DNA library) cDNA文库(complementary DNA library) 基因组DNA文库: 是指将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。 将庞大的基因组分