紫皮大蒜和白皮大蒜中大蒜素含量的對比08科三马杏贤许爱娟叶晓阳.docVIP

PAGE PAGE 1 紫皮大蒜和白皮大蒜中大蒜素含量的对比 华南师范大学 生命科学学院 生物科学 马杏贤爱娟晓阳 要 本实验先使用同一种有机溶剂——95%乙醇（分析纯）分别提取紫皮大蒜皮和蒜肉及白皮大蒜皮和蒜肉中的大蒜素，再利用1.0 mmol/L 半胱氨酸溶液和1.0 mmol/L DTNB 溶液1 mL反应产生黄色物质NTB，通过可见光分光光度计在412 nm 波长下测量NTB的吸光值来计算大蒜素含量。从多组平行和对照实验组中对比分析大蒜素含量，为大蒜素提取工艺更好地选材提供依据。 关键词：紫皮大蒜 白皮大蒜 大蒜素 大蒜素含量 1 前言 大蒜是百合科一年生蔬菜，具有特殊的香辛气味,能促进消化、增进食欲以及具有显著的保健作用和巨大的药用价值。, 其中大蒜素是大蒜的主要活性成分, 是一种硫化丙烯类物质。 具多种生物活性，被誉为天然广谱抗生素，有抗真菌、抗细菌、降血酯、降血压、防治动脉粥样硬化等心血管疾病的作用，并具有良好的抗癌，防癌的作用。但在新鲜的大蒜中并不含有大蒜素，只含有它的前体——蒜氨酸，以稳定、无臭的形式存在于大蒜中, 当大蒜破碎后, 蒜氨酸在内源蒜酶的催化下, 经过充分接触反应生成大蒜素, 但大蒜素极不稳定, 易进一步分解成其他小分子的含硫化合物, 并产生强烈的蒜臭味。大蒜素具有巨大的价值，但其提取率比较低，成本也高，因而有许多有关大蒜素提取方法的探究或改进实验。而在考虑紫皮和白皮大蒜中大蒜素含量及紫皮大蒜和白皮大蒜的皮与大蒜素含量关系的实验却比较少，因而探究不同大蒜（本实验主要是市场常售的紫皮和白皮两种大蒜）在有皮大蒜，无皮大蒜和单独蒜皮的情况下比较大蒜素的含量就有了一定的意义。本实验正是本着为工艺制取大蒜素选材提供一个参考和依据。 2 实验目的 1）学会通过查阅文献等方法设计一个完整可行的实验 2）掌握缓冲溶液的配置及分光光度计等常见生化实验器材的使用。 3）了解从大蒜中提取和测定大蒜素的原理及相关不常见仪器的使用。 4）学会从大蒜中提取和测定大蒜素的操作方法。 5）学会通过探究紫皮大蒜和白皮大蒜中大蒜素提取率的不同，来探讨提取大蒜素的最佳材料。 6）测量大蒜皮中大蒜素的含量，更有利于大蒜素的提取和利用。 3 实验原理 3.1 大蒜素的提取 大蒜素纯品为无色油状物,具有大蒜异味。新鲜的大蒜中并不含有大蒜素，当大蒜破碎后, 蒜氨酸在内源蒜酶的催化下, 经过充分接触反应生成大蒜素,这是酶解过程。而相对于水来说，大蒜素易溶于乙醇、苯、乙醚等有机溶剂，故用乙醇进行提取。而参考大蒜素的提取工艺研究[1],用95%的乙醇使得大蒜素的萃取率最高，而且萃取温度为常温时，萃取的效果也比较好。乙醇易于挥发，用蒸馏的方法可以分离乙醇和大蒜素，在50℃、0.01MPa下，大蒜素的提取率最高。压强过低,大蒜素容易直接随有机相进人旋转蒸发仪的接受瓶。压强过高,有机相又不易挥发出来,导致蒸馏时间过长。因而需减压蒸馏的方法进行分离（蒸馏装置也可用普通蒸馏装置和真空泵完成） 3.2 大蒜素含量的测定 一分子大蒜素(C6H10S2O)和两分子半胱氨酸(C3H7NO2S)反应生成两分子S- AMC(C3H5- S- S- CH2CH-(NH)2COOH)。将过量的半胱氨酸与大蒜素反应, 用DTNB(5,5 - 二硫代双(2- 硝基苯甲酸))法测定反应前后半胱氨酸量,也就是一分子半胱氨酸与一分子DTNB(5,5- 二硫代双(2- 硝基苯甲酸))反应生成黄色物质NTB(2- 硝基- 5- 硫代苯甲酸), NTB 在412 nm 处有最大吸收, 摩尔消光系数为14150(光径1 cm), 用分光光度法测得半胱氨酸含量。然后根据半胱氨酸减少量计算出大蒜素含量。 4 实验设备 一台组织捣碎机，一台恒温水浴箱，一台离心机，一台可见光分光光度计，减压蒸馏装置一套（或用普通蒸馏装置和真空抽气泵），比色杯一套，试剂瓶4个，18个500ml锥形瓶，6个500ml烧杯,7支10ml移液管，3支1ml移液管，4支胶头滴管，6只药勺，标签纸，20支10ml试管，1个洗液瓶，2个棕色瓶 5 实验材料及试剂 a 试剂的配置 蒸馏水，95%的乙醇，50mmol/L pH7.5 的Tris - HCl 缓冲溶液（由Tris - Base(Sigma)加HCl 配制）, 1.0 mmol/L DTNB（5,5 - 二硫代双(2- 硝基苯甲酸 )溶液由DTNB(Sigma)加50 mmol/L pH7.5 的Tris - HCl 缓冲溶液配制, 存于棕色瓶中）; 1.0 mmol/L L- 半胱氨酸溶液（由L- 半胱氨酸(Si