菜籽粕中抗營养因子植酸酶解条件的研究.docVIP

菜籽粕中抗营养因子植酸酶解条件的研究 摘 要:在菜籽粕中直接添加外源植酸酶,作用于菜籽粕,使其一种主要的抗营养因子(ANF)植酸分解,根据影响酶反应的主要因素:温度、pH值、反应时间、酶浓度等进行单因素试验,选择合适的因素水平按L9(34)设计,通过正交试验对酶解条件进行了优化。结果表明:植酸酶酶解的优化条件为温度45e、pH值4. 7、反应时间90 min、酶浓度2. 4% (菜籽粕量),植酸 酶解率可达60%。 关键词:菜籽粕;植酸酶;抗营养因子;酶解条件;饲料 本文采用直接添加外源植酸酶以降低菜籽粕中植酸的 含量,研究酶解的温度、pH值、酶的浓度、酶解时间等因素, 以期寻求到最佳的酶解条件,为酶制剂更好地应用于菜粕蛋 白提供基础的研究。 1 材料与方法 1.1 材料、试剂与仪器 菜籽粕(中牧饲料制造有限公司提供)、植酸酶 (5 000 U/g)(北京昕大洋科技发展有限公司提供)、浓硫酸、 钼酸铵、抗坏血酸、醋酸、醋酸钠等均为分析纯。紫外分光光 度计、pH计、电热鼓风干燥箱。 1.2 试验方法 1.2.1 植酸测定(钼兰比色法)[1、2] 1.2.1.1 标准曲线制作 称取定量磷酸二氢钾,按梯度制成标准溶液,以无机磷 含量对应其吸光度值,作标准曲线,得回归方程。 1.2.1.2 样品中植酸含量测定 称取定量预处理的样品,制成一定稀释度的样品液待 测。分别取两份,一份消化后测其吸光度值,另一份不经消 化直接测吸光度值,然后根据两者差值,由磷酸二氢钾标准 曲线算出植酸磷含量,再乘以换算因子3. 55,得出植酸含量。 1.2.2 植酸酶酶解条件单因素试验 1.2.2.1 酶浓度试验 准确称取8份预处理后的菜籽粕50 g,加入醋酸-醋酸 钠缓冲液使之pH值为4. 7,按表1分别加入不同水平的植 酸酶,搅拌均匀于45e温度下酶解120 min。 表1 酶浓度单因子试验方案 试验号1 2 3 4 5 6 7 8 植酸酶水平/% 0 0. 4 0. 8 1. 2 1. 6 2. 0 2. 4 2. 8 1.2.2.2 酶解温度试验 准确称取6份预处理后的菜籽粕50 g,加入醋酸-醋酸 钠缓冲液使之pH值为4. 7,和1. 6%植酸酶搅拌均匀,按表2 控制不同酶解温度酶解120 min。 表2 酶解温度单因子试验方案 试验号1 2 3 4 5 6 酶解温度/e35 45 55 65 75 85 1.2.2.3 酶解时间试验 准确称取6份预处理后的菜籽粕50 g,加入醋酸-醋酸 钠缓冲液使之pH值为4. 7,和1. 6%植酸酶搅拌均匀,控制 酶解温度45e,按表3酶解不同时间。 表3 酶解时间单因子试验方案 试验号1 2 3 4 5 6 酶解时间/min 30 60 90 120 150 180 1.2.2.4 酶解pH值试验 准确称取6份预处理后的菜籽粕50 g,分别加入1. 6% 植酸酶,按表4加入醋酸-醋酸钠缓冲液控制不同酶解pH 值,于45e下酶解120 min。 表4 酶解pH值单因子试验方案 试验号1 2 3 4 5 6 pH值3. 4 3. 5 4. 7 4. 8 4. 9 5. 0 1.2.3 植酸酶酶解条件正交试验及优化方案验证 结合单因素试验结果和工业化可实现性,选择各因素合 适水平进行正交试验,考察各因素水平组合对植酸酶酶解的 影响,见表5。 表5 植酸酶酶解条件正交试验因素水平表 水平因 素 温度/epH值酶浓度/%酶解时间/min 1 2 3 40 45 35 4. 7 4. 8 4. 9 2. 0 1. 6 2. 4 60 90 120 将正交试验得到理论优化方案与正交试验中吸光度值 最高的试验号分别再做3个平行样,比较吸光度值大小,以 进行理论优化方案的验证。 2 结果与分析 2.1 植酸测定 2.1.1 植酸标准曲线制作 回归方程:C=0.172A, r=0.998 6;A为吸光度值;C为 对应磷含量,mg/ml。 2.1.2 酶解效率 称取10 g左右样品, 30 ml的体积分数为10%HCl溶解, 从中吸取2 ml定容至50 ml制得样品液,测吸光度。32 刘 军等:菜籽粕中抗营养因子植酸酶解条件的研究/2009年第1期 酶解效率=(C1-C0)@3.55@50@30/m样@C总, 式中,C1为酶解液的磷含量,mg/m;lC0为未处理菜籽粕样液 磷含量,mg/m;lm样为样品质量, g;C总为菜粕植酸总含量, mg/g(本试验菜粕植酸含量为28. 988 2 mg/g); 3. 55为无机 磷与植酸的转换系数。 2.2 植酸酶解条件试验结果 2.2.1 酶浓度对酶解效果的影响 由图1看出,随着酶浓度的增加,吸光度值逐渐增大,也 即被酶解的植酸量逐渐增多,酶解效果呈现上升趋势。当酶 浓度由1.