HXY第章基因的重组与转移.ppt

直接把外源DNA注射到宿主细胞核里，使其整合到染色体上。 3. 显微注射法(microinjection) 二乙氨乙基（diethyl-aminoehtyl，DEAE）葡聚糖能促进哺乳动物细胞摄入外源DNA。 4. DEAE---葡聚糖传染法 葡聚糖 葡聚糖+DNA 吸附到细胞表面后被细胞吞入，部分DNA可以进入到细胞核里。 DEAE-dextran 细胞 外源DNA 预处理 摄入 DEAE-dextran 外源DNA 细胞 混合 DEAE-dextran对细胞有毒! 5. 病毒（virus）介导 （详见另外章节） 小结： 外源基因导入细胞的方法 2. DNA插入的方向正确 （1）用双酶切 由于产生的粘性末端不同，只能以固定方向连接。 EcoRI BamHI EcoRI BamHI EcoRI BamHI 3. 插入基因的开放阅读框（ORF）正确 （1）DNA定向插入 （2）起始密码 尤其当载体上有ATG起始密码的时候，更要注意。 ATGGAATTC 载体 ATGCGGAATTCT 插入片断 EcoRI EcoRI ATGGAATTC T 重组 但移码突变！ 4. 防止载体自身环化 （1）提高插入片断的用量 连接反应体系中，插入片断比载体多10倍以上。 （2）用碱性磷酸酶处理载体 载体切口的5’磷酸被除去，不能自我连接。但可以与插入片断以单链连接。 5’ 3’ 载体 插入片断