PIPK文：猪PIPK基因的克隆表达及甲型流感病毒感染对其表达的影响.doc

P58IPK论文：猪P58(IPK)基因的克隆表达及甲型流感病毒感染对其表达的影响 【中文摘要】P58IPK是干扰素诱导、dsRNA激活的蛋白激酶PKR的胞内抑制剂。流感病毒感染后P58IPK在翻译后水平激活,P58IPK的激活导致PKR介导的eIF-2α磷酸化水平降低,使病毒蛋白表达水平增高,对病毒复制有利。然而,敲除P58IPK的小鼠感染病毒后死亡率却显著升高,并有严重的肺部病变和炎症反应。本研究旨在分析猪P58IPK在流感病毒感染中的作用,具体实验内容与结果如下:1.本研究依照人P58IPK基因序列克隆得到猪源P58IPK基因,并用生物信息学分析猪源P58IPK的序列特征与进化关系。猪源P58IPK全长1 518 bp,编码505个氨基酸,蛋白的N端和C端高度保守,猪源P58IPK与人源P58IPK蛋白相似度高达99.21%。2.将P58IPK克隆到pET-32a原核表达载体上,转化到大肠杆菌表达菌BL21（DE3）中,在IPTG浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导7 h时,融合蛋白His-P58IPK可溶性表达量最大,经HiTrapTM Chelating HP层析柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得P58IPK的多克隆抗体。经检测多抗效价达到1:100000,具有特异反应性。3.将基因克隆到pEGFP-C1和pEGFP-N1真核表达载体上,采用脂质体转染法转染猪脐静脉血管