07生物素-亲和素技巧.pptVIP

免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方法，用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色。 PCR具有很强的放大能力，其可以定量地检测DNA和RNA，具有非常高的敏感性和特异性，因此，将与抗原结合的特异抗体通过连接分子与DNA结合，再经PCR扩增，由此定量检测抗原使敏感性高于ELISA和RIA。 1. 抗原+生物素化抗体→抗原-生物素化抗体复合物； 2. 加亲合素→抗原-生物素化抗体-亲合素复合物； 3. 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗体-亲合素-生物素化DNA； 4. PCR扩增生物素化DNA部分。 引物 延伸 延伸 5’ 5’ 3’ 3’ 变性、退火 变性、退火 30轮循环 扩增量达230个拷贝（109拷贝） PCR产物每轮循环增加一倍 免疫PCR技术目前尚处于研究阶段，应用的还不多； 实验表明免疫PCR的敏感性比ELISA高105倍，且PCR产生的背景信号很弱，可以检测到几百个分子的抗原，在理论上免疫PCR可以检测到一个分子抗原，因此，免疫PCR特别适用于检测一些含量特别少的抗原分子。 在报道的文献中均采用待检抗原直接吸附固相，这样固相的均质性必然对结果有很大的影响；同时检测的样品液中其它成分也可以吸咐固相，极易产生背景过高或精确度下降。 如用微量板作为固相需选用配套的PCR仪，否则需将其移入反应管内，这必然导致