chapter07 蛋白质的分离、纯化和表征.ppt

第七章 蛋白质的分离纯化 四、蛋白质分离纯化的基本原则 1、前处理：匀浆、捣碎及超声破碎，离心分离 组分 2、粗分离：盐析，等电点沉淀，有机溶剂沉淀， 超滤 3、细分离：凝胶过滤，离子交换层析，亲和 层析，电泳等 超声破碎仪 超滤装置 凝胶过滤的工作原理 （二）根据溶解度差别： 1、等电点沉淀法：等电点时蛋白质溶解度最低，不同蛋白具有不同等电点。 2、盐析法: 最先聚集沉淀的是表面疏水残基最多的蛋白质。 3、有机溶剂法：不同蛋白质沉淀要求的有机溶剂浓度不同。 （三）根据电荷不同： *离子交换层析 蛋白质的定量法 克氏(Kjeldahl)定氮法: 浓硫酸加热降解蛋白质后测定NH3 双缩脲(biuret)法: CuSO4与肽链的氨基结合 Folin-Phenol法: BCA (bicinchoninic acid)法: FDA唯一认可 Bradford法: 考马斯亮兰 ( Coomassie brilliant blue G250)与肽链结合后吸收谱变化 紫外法: 280纳米处的紫外吸收 (1 OD280 = 1 mg/ml) 习题 盐析作用 疏水相互作用 透析 *分离纯化蛋白质主要根据蛋白质的哪些