分子生物学聚合酶.ppt

Section K: Transcription in prokaryotes(原核生物转录) K1: Basic principles oftranscription 转录：双链DNA为模板的单链RNA的酶 促合成。 RNA聚合酶 5’－3’方向 Key terms defined in this section(Gene VII) RNA polymerases（RNA聚合酶） are enzymes that synthesize RNA using a DNA template. Primary transcript（原初转录产物） is the original unmodified RNA product corresponding to a transcription unit. 有义链（编码链） 反义链（模板链） Promoter（启动子） 是基因起始处的DNA序列，即在编码区到 5’端（上游）。 起始位点: +1位置 终止子：转录终止的特定DNA序列。 复制与转录 复制 1DNA分子两个单链为模板——2DNA分子 转录 DNA双链之一为模板——1RNA单链 an overview 1. RNA synthesis occurs in the 5’--3’ direction and its sequence corresponds to that of the DNA strand which is known as the sense strand (有义链). 2. The template of RNA synthesis is the antisense strand (反义链). 3. Necessary components: RNA polymerase, transcription factors, rNTPs, promoter terminator K2 E. coli RNApolymerase 1. E. coli RNA polymerase 2. α subunit (亚基） 3. β subunit 4. β’subunit 5. sigma (?) factor K2-1 E. coli RNA polymerase (大肠杆菌RNA聚合酶) RNA聚合酶负责RNA的合成(转录） E. coli RNA polymerase 1. 能转录各种类型 RNA. 2. E. coli细胞中最大的酶之一。 3. 至少有5个亚基组成（ α，β，β’ ，w，?） 全酶： （2α，β，β’ ，w，?) 核心酶： （2α，β，β’ ，w） 4. 直接结合 16 bp 的 DNA；整个酶覆盖 60 bp. 5. RNA 合成速度: 40 nt per second at 37oC E. coli RNA polymerase RNA polymerase differs fromorganism to organism E. coli polymerase: α subunit 在核心酶中有两个 由rpoA gene编码 对于核心酶的组装是必需的 可能在启动子识别中发挥作用. K2-5: Sigma (?) factor K3 大肠杆菌?70启动子 1. Promoter（启动子） 2. ?70 size 3. -10 sequence -35 sequence 转录起始点 4. 启动子效率 K-1 启动子 定义：RNA聚合酶结合到待转录序列上游的特定起始位点。 K3-23: ?70 promoter ?70 启动子大小 ?由 40 and 60 bp的序列组成 ?-55 to +20: 被聚合酶结合 ?-20 to +20: 紧密结合聚合酶 ? Up to position –40: 对启动子是必须的 ?-10 and –35 sequence: 6 bp each, 对E. coli中启动子的功能尤为重要。 启动子效率 不同启动子的序列之间有很大差异，而且其转录效率相差可高达1000倍 －35序列：增强与聚合酶因子相互作用的识别区 －10序列：对于DNA解旋很重要 起始位点附近序列：影响转录起始 最初转录的30个碱基序列：控制RNA聚合酶离开启动子，使另一聚合酶得以重新起始转录的速率。 K4 转录的起始，延伸与终止 启动子结合 DNA解旋 RNA链起始 RNA链延伸 RNA链终止 Initiatio