分子生物学方法在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值分析.doc

分子生物学方法在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值分析 王超1, 包训迪2,王庆1,2 [作者单位]1,2. 安徽省胸科医院检验科，安徽 合肥 230022 [作者简介]王超，男，1987年出生，硕士，临床检验师。 [通讯作者]王庆，男，安徽省胸科医院检验科主任，副教授。 【摘要】:目的 分析分子生物学方法荧光定量PCR在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法 回顾性分析2014年4月-2015年4月本院诊治的306例确诊肺结核患者和108例非结核病患者临床资料，结核患者按照不同检查方式分为三组（306例），将萋-尼氏法抗酸菌染色涂片检查方法设为实验A组；将分枝杆菌快速液体培养法检查方法设为实验B组；将荧光定量PCR（FQ-PCR）检查方法设为研究组，对比三组检测结果；收集同期临床108例确诊为非结核病患者痰标本行以上三项检查，分别设为对照A组、对照B组和研究对照组，对比分析三组检测结果。 结果 实验B组与研究组痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组的26.47%（P＜0.05），且研究组检出率64.71%显著高于实验B组的40.85%（P＜0.05）；另外通过对非结核患者痰标本的检测发现，对照A组与研究对照组检测特异性均显著高于对照B组，其中研究对照组最高，为98.15%，且高于对照A组，均具统计学意义（P＜0.05）。结论 荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA具积极应用价值，可提高痰标本中结核分枝杆菌检出，检测灵敏度和特异性均较高，操作简捷，可作为结核病临床常规检测方案。 【关键词】荧光定量PCR;痰结核分枝杆菌DNA;检测;价值 结核病是发展中国家一种致死性疾病，伴随HIV的流行，结核病现已成为世界严重公共卫生问题[1]。有研究表明，结核病的延迟诊断给患者及亲密接触者造成严重不良后果，因此，临床早期明确诊断具有重要意义[2]。由于痰样本采取较简单、易得，是一种常用的检测样本。故本研究中通过采用三种不同检查方式检测本院306例结核病患者的痰结核分枝杆菌，旨在为该疾病患者临床检查探讨最佳实验室检查方案，现将研究结果报告如下： 1.资料与方法 1.1一般资料 回顾性分析2014年4月-2015年4月本院诊治的306例结核患者临床资料，依据临床表现及影像学等检查确诊为肺结核病患者[3]。按照不同检查方式分为实验A组、实验B组和研究组；本组患者男女比例189:117，年龄20-75岁，平均（49.36±2.21）岁，临床主要症状表现：盗汗、低热、体重下降、呼吸道感染等；同时收集同期临床108例非结核病患者痰标本，按照不同检查方式分为对照A组、对照B组和研究对照组。 1.2方法 1.2.1采集痰标本 通常在清晨，待患者食用生理盐水多次漱口之后，弃去第1口痰液，采取深部咳痰3口分别装入3个无菌标本盒内，标记，送检。 1.2.2检查方法 ①萋-尼氏抗酸菌涂片染色法：参照《全国临床检验操作规程（第3版，792-796）》相关规定进行操作[4]，无需特殊设备，所需染液均由实验室按试剂标准自行配置。②分枝杆菌快速液体培养法：选择美国BD公司（Becton,Dickinson and Company）提供的BACTECTM MGITTM 960液体培养箱和试剂，检查方式严格参照仪器及试剂配套说明书开展操作，操作方式均需在生物安全柜内实施。③荧光定量PCR法：仪器为美国ABI公司生产的ABI7500 Sequence Detector分析仪，试剂盒为中山大学达安基因诊断中心提供的结核分枝杆菌DNA检测试剂盒。参照仪器及试剂盒配套说明书进行操作；扩增完成后计算机自动进行分析。 1.3观察指标 三组痰分枝杆菌检出率；三组检出特异性。 1.4统计学处理分析 本研究数据均用SPSS20.0统计软件进行分析处理，计量资料采用均数标准差（x±s）表示，组间比较用t检验，计数用百分比（%）表示，以X2 检验，当P＜0.05，表示比较差异具统计学意义。 2.结果 2.1三组痰分枝杆菌检出数对比 实验B组培养法与研究组PCR法的痰分枝杆菌检出数均比实验A组抗酸染色法高，其中PCR法检出数198最高，且高于培养组，详见表1。 表1 三组研究方法检测痰标本结果 组别 例数（n） 抗酸染色法 阳性数 培养法 阳性数 PCR法 阳性数 结核组 306 81 125 198 非结核组 108 5 11 2 2.2三组方法检测检出率和特异性对比 实验B组与研究组检测痰分枝杆菌检出率均显著高于实验A组的26.47%（P＜0.05），且研究组检出率64.71%显著高于实验B组的40.85%（P＜0.05）；同时，用三种方法检测108例非结核病患者痰标本发现, 研究对照组检测特异性均高于对照A组和对照B组，比较差异明显具统计学意义（P＜0.05），详见表2。同时，FQ