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实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜观察 一 实验目的 1 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 2 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方法。 二 实验原理 细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，成分有微丝、微管和中间纤维。 Triton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。 戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光学显微镜观察网状结构的由微丝组成的细胞骨架。 三 实验仪器、材料和试剂 1 仪器、用具：普通光学显微镜等 2 材料：洋葱鳞茎 3 试剂： ⑴ M-缓冲液 ⑵ 6mmol/L磷酸缓冲液 ⑶ 1% Triton X-100 ⑷ 0.2%考马斯亮蓝R250 三 实验仪器、材料和试剂 3 试剂： ⑸ 3%戊二醛 ⑹ 50%、70%、95%乙醇 ⑺ 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶 四 实验方法(Ⅰ) 1 洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→ 50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉 2 吸去缓冲液→ 加1% Triton X-100 20~30 分钟 3 吸去Triton X-100→ M-缓冲液洗 3次/10分钟 4 3%戊二醛固定 0.5-1小时 四 实验方法 5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟 6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 20~30分钟 7 蒸馏水洗 1-2次→装片→观察 8 制作永久切片 四 实验方法(Ⅱ) 取洋葱内皮1cm 左右 置于含PBS 液的载玻片上 湿润后，吸去PBS 加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min 吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min 加PBS 洗2 次，共3min 加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min 用PBS 洗2 次，共2min，吸干 镜检并绘图 细胞骨架标本制作过程 五 作业 1 绘出植物细胞骨架微丝结构图。 2 分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。 3 为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材料？ 植物细胞骨架微丝结构图 植物细胞骨架微丝结构图 植物细胞骨架微丝结构图 植物细胞骨架微丝结构图 植物细胞骨架微丝结构图 植物细胞骨架的形态特征 细胞骨架观察结果 光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如图），细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不同。 植物细胞骨架的形态特征 细胞骨架观察结果 10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。