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5、种龄 种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 舒琴， 林产化学与工业，2004 镜检：24小时多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期 30小时开始出现芽孢 6、种子的质量要求： 量：要求达到一定的浓度 质: 形态 （生长处于某个阶段、均匀等等） 理化指标：C、N、P的含量，pH、 酶活等 无污染 影响种子质量的主要因素 1.培养基：碳源、氮源、无机盐、生长素、水 选用原则：组分简单，来源丰富，价格便宜，取材方便等。 2.培养条件 ①温度：温度直接影响生长和酶的合成； ②pH值：对微生物有明显的影响。 ③通气搅拌：（溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用） ④泡沫(危害：影响微生物对氧的吸收；妨碍CO2的排除；减少设备利用率) 3.染菌的控制 染菌原因：设备、管道、阀门漏损、发酵罐结构“死角”、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严、菌种不纯； 4.种子罐级数 ：种子罐级数取决于： ①种子的性质（生长繁殖性能）； ②孢子瓶中孢子的密度（密度大则级数少）； ③孢子发芽及菌丝繁殖速度； ④发酵罐中种子的最低接种量； ⑤种子罐与发酵罐的容积比； 微生物发酵的原理 就是利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术和设备来生产有用物质或将微生物直接用于工业化生产获得目的产物的技术体系。包括预处理、发酵和提纯三大工序 （一）预处理 1、 原料预处理：用于发酵的农产品是发酵的原料，为了提高它们的利用率，以及方便对其进行加工，通常需要将这些原料粉碎；对于不能直接利用淀粉或者直接利用淀粉效率不高的微生物，发酵前还要将淀粉水解成葡萄糖；除碳源外，微生物的生长还需要氮源、磷、硫及许多家属元素，这些原料也需要预处理。 2、 发酵培养基的配置和灭菌 （1）培养基的配置原则 a.根据不同微生物的需要配置不同的培养基 b.各种营养物质的浓度与配比，特别是C/N c.将培养基的pH控制在一定范围内 d.考虑利用价廉且易于获得的原料 (2)培养基灭菌方法：采用高温短时的灭菌方法可以减少养分的破坏。 3、 无菌空气制备 好氧微生物的生长和产物生长过程都需要氧气，一般用空气作为氧气的来源。但自然界中的空气含有很多微生物，因此，在将空气通入发酵罐之前必须灭菌处理。其方法包括： （1）加热灭菌（220°C，20秒）：灭菌彻底，能耗大，成本高 （2）电除菌：除菌效果差，仅用于初除菌 （3）辐射灭菌：254-265nm效果最佳，仅限表面灭菌 （4）介质过滤除菌：主流的除菌方式 4、 微生物种子的制备 将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant)接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐(Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。 三级发酵：斜面菌种-一级种子摇床培养-二级种子罐培养-三级种子罐培养-发酵罐生产 (二)发酵 从不同的角度可将发酵分成不同的类型。根据是否需要氧气可分为厌氧发酵（静置发酵）和好氧发酵（通气发酵）；根据发酵培养基的性质可分为固态发酵和液态发酵；根据发酵方式的不同可分为分批发酵、补料分批发酵及连续发酵等。 厌氧发酵：适用于厌氧或兼性厌氧微生物的发酵，如丙酮丁醇发酵、酵母菌的酒精发酵、乳酸发酵等 好氧发酵：适用于好氧微生物的发酵，如链霉素、谷氨酸、柠檬酸等的发酵 固态发酵：指发酵培养基的状态是固体。如大曲酒发酵及红曲发酵等 液态发酵 ：指发酵培养基的状态为液体。绝大多数纯种发酵都为液态发酵，如青霉素发酵 分批发酵：指在发酵过程中，除了不断进行通气（好氧发酵）和为调节发酵液的 pH 而加入酸碱溶液外，与外界没有其它物料交换的一种发酵方式。培养基的量一次性加入，产品一次性收获，是目前广泛采用的一种发酵方式 其优点是： ① 对温度的要求低，工艺操作简单； ② 比较容易解决杂菌污染和菌种退化等问题； ③ 对营养物的利用效率较高，产物浓度也比连续发酵要高。 缺点是： ① 人力、物力、动力消耗较大； ② 生产周期较长，由于分批发酵时菌体有一定的生长规律，都要经历延滞期、对数生长期、稳定期和衰亡期，而且每批发酵都要经菌种扩大发酵、设备冲洗、灭菌等阶段； ③ 生产效率低，生产上常以体积生产率（以每小时每升发酵物中代谢产物的 g 数来表示）来计算效率，在分批发酵过程中，必须计算全过程的生产率，即时间不仅包括发酵时间，而且也包括放料、洗罐、加料、灭菌等时间。 连续发酵 ：指 连续不断地向反应器（发酵罐）中流加新鲜发酵液，同时又连续不断地排出发酵液，从而使 pH 、养分、