替代毒理学细胞试验_培训课件.ppt

海马神经元 * AD指的是阿尔茨海默氏症；PD指的是帕金森；OPIDN指的是有机磷中毒的迟发性神经病。 * 1.NK细胞杀伤活性检测有两种方法：乳酸脱氢酶测定法（靶细胞受到自然杀伤细胞杀伤后，细胞膜的通透性发生改变）同位素51Cr测定法，同位素靶细胞和自然杀伤细胞共同培养,当靶细胞被NK细胞杀伤后，同位素从被破坏的靶细胞中释放出来，其同位素释放量与NK细胞的活性成正比。2. T淋巴细胞增殖试验：刀豆素刺激淋转试验-MTT法/同位素掺入法。B淋巴细胞增殖试验与T淋巴细胞增殖试验一致。4.巨噬细胞吞噬活性测定：巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（体外法）。 * 1.MCF-7细胞的竞争性雌激素受体结合试验：在外源化学物存在情况下，观察雌二醇与MCF-7细胞表达的雌激素受体的总结合能力变化，从而确定外源性化学物是否可以竞争性的与雌激素受体结合。 * 哺乳动物的生殖发育周期是多环节的复杂过程，这一特点决定了不可能在体外完全的模拟。 * 神经嵴细胞分离整个过程涉及细胞增殖、细胞间通讯、与基质的粘附、细胞外基质的产生和分化，并具有快捷定量和定性评价被测物质，可用生化方法重复测定物质的合成及酶活性的优势，但是所需细胞量大，且试验中胚胎分离技术难度较大，应用受到一定程度的限制。 中脑细胞：啮齿类动物孕13d的胚胎中脑细胞处在神经细胞分化前期，经体细胞培养后随神经细胞的增殖分化而形成细胞集落和神经细胞典型的神经突起。此期间，对化学毒物作用敏感，毒物可抑制细胞分化与增殖，从而使 细胞集落和细胞数目减少。 视网膜细胞培养：周期短，费用低，与体内致畸试验符合率高的特点，用于致畸物物的筛选和致畸机制研究。 胚胎心肌细胞保持了原有的基本性质，相关特性与体内发育同步，可用于研究化学物质对胚胎细胞增殖、分化、及对细胞与基质粘附和细胞间相互识别的影响。 * 细菌回复突变实验是以营养缺陷型的突变体菌株为试验系统，观察受试物引起其回复突变的作用。TA1537/TA97/TA98主要用于检测移码型突变；TA1535/TA100/TA102/TA104均可以检测碱基置换型突变。 * * 小鼠淋巴瘤（L5178Y）细胞胸苷激酶位点突变检测。CHO细胞及中国仓鼠肺V79细胞次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶位点突变检测 * 原代培养肝细胞容易分离，保留肝微粒体代谢酶系的优点，因此常用原代培养肝细胞做UDS实验的靶细胞 * 恶性转化试验是利用培养的哺乳动物细胞接触化学物质后，观察该细胞恶性转化的一种检测方法。 * * 替代毒理学----细胞学 王秀会 2014-4-4 目录 体外细胞模型的特点 体外细胞模型的应用 总结 1.原代培养的细胞和细胞系与机体其他部位不存在任何 关联，且相对较为敏感。 2.细胞工程为毒理学研究提供了新工具，将永生细胞系 扩大到特殊功能的细胞系，可以更好的研究作用机制。 3.通过早期细胞反应研究预测体内毒性反应，如氧化应 激，谷胱甘肽稳态、细胞应激反应、酶活性变化和细 胞因子反应等。 细胞模型的特点 局部毒性评价（皮肤体外试验、眼毒性评价） 肝脏毒性评价 肾脏毒性评价 心脏毒性评价 神经毒性评价 免疫毒性评价 内分泌干扰物毒性评价 生殖发育毒性评价 遗传毒性和致癌性评价 细胞模型的应用 皮肤腐蚀性体外模型：人重组皮肤模型EPISKINTM和EpiDermTM -人角质细胞和人表皮角质细胞 皮肤刺激性体外模型：人重组皮肤模型EPISKINTM和EpiDermTM -人角质细胞和人表皮角质细胞 皮肤光毒性体外模型： 光毒性筛选试验：3T3成纤维细胞、成纤维细胞层、 人角质形成细胞、肝细胞 皮肤过敏性体外模型：树突状细胞、角质形成细胞（KC） 皮肤毒性评价 眼毒性评价 细胞种类 角质形成细胞 成纤维细胞 角膜上皮细胞 应用 通过检测受试物对离体细胞功能的影响及毒性作用预测眼刺激。 肝脏毒性评价 细胞种类 原代肝细胞 肝细胞系 亚细胞 应用和优势 1.在缺乏肝外因素的情况下评价肝损伤的可能性，排除了吸收、分布、化学物的肝外代谢、体液因素以及其他部位产生的毒性效应的影响。 2.利用人肝细胞进行试验，解决了物种差异问题 肾脏毒性评价 细胞种类 肾细胞培养（原代肾近曲小管细胞、永生化的肾细胞） 细胞