ELISA2-乙肝两对半.pptVIP

乙肝两对半的检测 临床免疫学教研室 邓念华 【目的要求】 1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。 BIORAD680型自动化酶免分析仪、BIORAD全自动酶标洗板机、微量加样器、吸头等 【试剂】 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照75ul/孔，轻轻振荡混匀； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应60min; 加酶结合物： 每孔加入50ul/孔 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，混匀，贴上封膜，37℃反应30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度) 结果判断及解释： COV=2.1×N 阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴性 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，3