梭鱼养殖与自然的遗传议.docVIP

梭鱼养殖与自然的遗传刍议 以梭鱼尾鳍鳍条为材料,采用苯酚—氯仿抽提法提取基因组DNA后,于4℃条件下避光保存备用,引物与反应条件。RAPD反应总体系为30μl,其中含有10×Buffer3μl、dNTP(各2.5mmol/L)0.4μl、Primer(100μmol/L)0.24μl、TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.3μl、模板DNA0.3μg。RAPD反应程序包括35个循环:94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min。首轮循环前94℃预变性4min,最后1个循环后在72℃下延伸5min,产物置于4℃条件下保存。琼脂糖凝胶电泳。将扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳,恒压85V电泳50~75min,使用凝胶成像分析仪检测并拍照。数据统计与分析多态位点比例。统计时仅记录清晰、稳定的电泳带,统计位点总数、多态位点数,然后按照以下计算公式计算多态位点的比例(P):P=某群体多态位点数/位点总数×100%。聚类分析。根据琼脂糖凝胶电泳结果,利用GelComparⅡ4.0数据处理系统软件,应用UPGMA法进行系统聚类分析。 Barracuda caudal fin ray as materials, using the phenol - chloroform extraction to extract genomic DNA, in 4 ℃ avoid light