第三章载体d2006.pptVIP

a. 需要脱磷酸化处理。 b. 电泳纯化载体两臂。 c. 载体两臂的最终得率少的可怜！ 2）Ish-Horowice—Burke方案的缺点 防止载体自我连接 第二次酶切后。 1983年P.F. Bates和R.A. Swift ② Bates---Swift 改良方案 a. 具有两个cos位点。 SmaI平端的连接效率低，阻止了载体臂的自我连接，增加了外源DNA的连接效率。 1）特点： b. 一个SmaI切点把两个cos位点分开。 c. BamHI克隆位点。 c2XB cosmid载体 Bates---Swift 克隆过程： 第三节 大分子DNA克隆载体 人工染色体克隆载体实际上是一种”穿梭”克隆载体,含有质粒克隆载体所必备的第一受体(大肠杆菌)源质粒复制起始位点(ori),含有第二受体(酵母)染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因。这样的载体在第一受体细胞内可以按质粒形式进行高拷贝复制。在体外，这种载体与目的片断重组后，转化第二受体细胞，可在转化的细胞内按染色体DNA复制的形式进行复制和传递。筛选第一受体的克隆子，一般采用抗菌素抗性选择标记；而筛选第二受体的克隆子，常与受体互补的营养缺陷。 A.W.Murray 1983年形成基础理论, D.T.Burke等1987年变为现实。 一、酵母人工染色体 1. YAC的特点： （1）能在酵