碱性磷酸酶米氏常数及活性的测定辩析.pptVIP

碱性磷酸酶米氏常数的测定 浙江中医药大学生命科学学院 生物化学教研室 [原理] 酶催化底物发生反应时，受多种因素影响，环境的温度、pH和酶的浓度等等，在环境的温度、pH和酶的浓度一定时，酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(Vmax)，如图37所示 （一）?? Km值测定的意义 1.当反应速度为最大速度一半时，Vm = 1/2 Vmax，Km = [S] Km是指底物的浓度，含义：Km值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度。 2. Km值可表示酶对底物的亲和力。 Km值愈小，酶与底物的亲和力愈大；表示不需要很高的 底物浓度便可容易地达到最大反应速度。 3.Km值是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境相关，与酶的浓度无关。 各种酶的Km值范围很广。大多数酶在0.01-100mmol/L间；对于同一底物，不同的酶有不同的Km值；多底物反应的酶对于不同底物也有不同的Km值。 （二）酶活性（U/L） 酶活性单位：在特定条件下，酶促反应在单位时间内生成一定量的产物或消耗一