益生菌连续传代100代过程.docVIP

益生菌在常规培养条件下连续传代1000代过程中稳定性研究 摘 要：以益生菌Lactobacillus casei Zhang为研究对象，通过观察该菌株在普通MRS培养基中连续传代1 000代期间细胞 形态 、菌落形态 、活菌数、浊度和菌株活力的变化对其稳定性进行了初步评价。结果表明，L.casei Zhang在1000代期间细胞形态与菌落形态没有发生变化；活菌数、浊度均和菌株活力随培养代数的增加呈现波动性变化，但波动幅度较小，总数基本维持不变。 上述研究结果初步表明L. caseiZhang具有良好的稳定性，暗示其可用于产业化生产。 关键词：益生菌；Lactobacillus casei Zhang；连续传代；稳定性 Study on the stability of the probiotic Lactobacillus casei Zhang during continuous subculturing in normal condition for 1000 generations Abstract: In this study, we selected probiotic Lactobacillus casei Zhang as the research object, and its stability was assessed by monitoring the change of cell morphology, colony morphology, viable counts, growth (OD 600 ) and activity during the 1 000 generations. The results showed that bacterial cell and colony morphology of L. casei Zhang had no change, and the viable counts, growth and bacterial activity of L. casei Zhang fluctuated mildly. In a word, L. casei Zhang was stable during long-term contiuous subculturing, which can be further applied in indus- try. Key words: Probiotic; L. casei Zhang; Continuous Subculturing; Stability1 16Vol.41，No.11 2013(total 276) Research Papers 研究报告 0 引 言 益生菌是指通过摄入适当量从而对宿主产生有 益作用的活性微生物， 对人体主要具有免疫调节、调 整肠道菌群、防止腹泻、降低粪便中某些酶活性及抗 突变抗癌的医疗保健作用 [1-4] 。 通常益生菌都要经过严 格的筛选，还要经过动物实验和人体临床实验的综合 评价 [5-6] 。 此外，它们还应具备优良的遗传稳定性能 [7] 。 从微生物应用的角度来看，这也是菌株实现产业化生 产的必备条件。 益生菌Lactobacillus casei Zhang来源于草原蒙古族 几前年流传下来的原生态发酵乳饮料酸马奶 [8] 。 经过 多年系统的基础研究，我们自主解决了其产业化的关 键技术问题。本文通过观察该菌株在普通MRS培养基 中连续传代1 000代期间细胞形态、活菌数、浊度和菌 株活力的变化对其稳定性进行了评价，以期为后续试 验提供参考。 1 实 验 1.1 材料 1.1.1 菌株来源 益生菌L. casei Zhang原始菌株（0代）是由内蒙古 农业大学提供，LABCC编号IMAU10048。 1.1.2 试剂与仪器 试剂：法国梅里埃合成无糖MRS培养基，纽西兰 超特级脱脂乳粉，葡萄糖、盐酸、氢氧化钠、氯化钠、琼 脂粉等常用试剂均为国产分析纯试剂。 仪器：NSC-ⅡA-1200无菌工作台， 恒温培养箱 （LRH -500F）， 台 式 高 速 冷 冻 离 心 机 （Eppendorf， 5810R型 ），pH计 （SJ-3F型 ）， 超纯水系统 （MUL- 9000），HITACHI U-2000 型紫外可见分光光度计 ， HIRAYAMA HA-300M全自动高压灭菌器等。 1.2 实验菌株的连续传代培养及培养代数计算 将0代益生菌L. casei Zhang按体积分数为1%接种 量进行长期连续传代培养至1 000 代。 在每个传代周 期（24 h）内，菌体菌数约增长100倍，生长代数约为 6.64代 [9] 。 1.3 细胞形态学观察 在菌株L. casei