第四章蛋白质的分子结构.pptVIP

x-型和y-型HMW-GS蛋白结构示意图 Wrigley, Nature, 1996, 381: 738-739 五、蛋白质序列测定 （一）研究概况 50年代蛋白质化学方法的发展： Sanger 1953年建立测序方法，完成第一个蛋白质——胰岛素51个氨基酸序列测定（8年，1958年 Nobel prize）。 Moore and Stein 建立色谱技术和定量氨基酸分析技术（1972 年 Nobel prize ）。 Edman降解——N-测序法 Edman试剂：PITC（异硫氰酸苯酯） 瑞典有机化学家Edman生前未获Nobel奖， 1988年世界蛋白质结构分析技术大会设立了Edman奖。 70年代： Edman降解的仪器自动化 HPLC分析PTH氨基酸 液相自动蛋白质顺序分析仪 （Edman and Begg, 1967） 手工：10几个，仪器：40以上。 70年代初，发明固相蛋白质自动测序仪。 华裔学者张瑞耀：有色Edman试剂DABITC. ? -meander Greek key topology rare ( 回形拓扑结构 ) (? –曲折) ? - hairpin (?-发夹) 连接链是?-转角 全?结构蛋白质 反平行螺旋束 （上下型螺旋束） 珠蛋白型 蚯蚓血红蛋白 血红蛋白?亚基 ?螺旋占优势 单绕平行β桶 （平行β桶） ? ，?-结构蛋白质 双绕平行β片 （马鞍形扭曲片) 磷酸丙糖异构酶 黄素氧还蛋白 伴刀豆凝集素A 全?-结构蛋白质 希腊钥匙型 果冻卷型 上下型 露面夹心型 反平行?桶 反平行?片 ?折叠占优势 三级结构：tertiary structure 整个肽链的折叠情况: 具有二级结构的多肽链的空间排布. 1973：Rossman提出超二级结构：几种二级结构的组合物: αα ββ βαβ Porter提出结构域structural domain 指蛋白质分子中那些明显分开的球状 部分，如动物免役球蛋白有12个结构域。 四级结构：tertiary structure 1958：Bernal 四级结构：几个蛋白亚基结合成几何状排列:寡聚蛋白中亚基的种类、数目、空间排列以及亚基之间的相互作用。 （1）有互不相同的亚基组装 （2）有一种或几种不同亚基多次重复组装 三、蛋白质结构研究技术 1、X射线晶体学（protein crystallography, X-ray diffraction methods） 三维结构。 Bernal and Crowfoot (1934):第一个蛋白质晶体X射线图象； Kendrew(1960):测出第一个蛋白质晶体结构：肌红蛋白，随后Perutz解析出血红蛋白晶体结构；第3个为溶酶菌（Phillips,1965）. 1985:200种，1992：3000种，现已超过9000种。全球平均：3个/2 days. X射线晶体衍射分析原理： 衍射现象：光的干涉而形成。 衍射线的方向：确定晶胞的大小和形状 衍射线的强度：确定晶胞中原子的空间排布。 X射线晶体结构分析步骤： （1）克隆、表达、纯化 （2）结晶 （3）数据收集与处理 （4）相角的测定 （5）相角的改进（优化） （6）电子密度图的解释 （7）修正 （8）结构的描述和功能关系研究 2、多维核磁共振（NMR）技术 Nuclear Magnetic Resonance 溶液三维结构唯一有效手段。 1945：F.Bloch 和 E.Purcell独立发现NMR现象。1952：共同获Nobel物理奖 1971，Jeener提出二维核磁共振2D-NMR 1991：R. Ernst 2D-NMR谱方面的贡献获Nobel化学奖。 2002：K.Wuthrich 2D-NMR测定生物大分子在溶液中的三维结构，获Nobel化学奖。 Biological MS and NMR win the 2002 Chemistry Nobel Prize John Fenn: electrospray mass spectrometry for proteins (田中耕一)Koichi Tanaka: matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) mass spectrometry for proteins Kurt Wüthrich: