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DNA重组技术的基本工具、基因工程的基本操作程序复习 课前自主梳理案 一、基因工程的概念理解 1.供体：提供_________。 2.操作环境：_____。 3.操作水平：_____水平。 4.原理：_________。 5.受体：表达目的基因。 6.本质：性状在_____体内表达。 7.优点：克服________________障碍，定向改造生物_____。 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶(简称：限制酶) (1)来源：主要从_____生物中分离纯化出来。 (2)作用：识别特定的___________并切开相应两个核苷酸之间的____________。 (3)结果：产生_________或平末端。 2.DNA连接酶 (1)种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 (2)作用：在两个核苷酸之间形成____________以连接______________。 3.载体 (1)种类：_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 能_________ (2)质粒特点有 一个至多个_________ 有特殊的_________ 【点拨】提取目的基因和切割载体使用同一种限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 三、基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 (1)目的基因：编码蛋白质的_____。 (2)获取方法 从_________中获取 利用________扩增目的基因 通过_________用化学方法直接人工合成 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)基因表达载体的组成：__________、启动子、终止子、___________。 (2)构建基因表达载体的目的 ①使_________在_________中稳定存在，并且可以遗传给下一代； ②使_________能够表达和发挥作用。 3.将目的基因导入受体细胞 (1)转化：目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持___________的过程。 (2)常用方法 导入植物细胞：__________、基因枪法、花粉管通道法 导入动物细胞：_____________ 导入微生物细胞：感受态细胞法(Ca2+处理法) 4.目的基因的检测与鉴定 (1)________________→目的基因的有无 (2)分子杂交技术→_________________ (3)_______________→目的基因是否翻译 (4)生物性状的表达与否→目的基因是否表达(个体水平) 【点拨】启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结束。  自我检测 1．（2012·淮北一中期中）下列有关基因工程叙述错误的是(　　) A．最常用的载体是大肠杆菌的质粒 B．工具酶主要有限制性核酸内切酶和DNA连接酶 C．该技术人为地增加了生物变异的范围，实现种间遗传物质的交换 D．基本原理是DNA具有双螺旋结构以及遗传信息传递和表达方式相同 2．图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是(　　) A．DNA连接酶、限制酶、解旋酶 B．限制酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制酶、DNA连接酶 D．限制酶、DNA连接酶、解旋酶 3.某研究小组为了研制预防禽流感病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下图。下列有关叙述错误的是(　　) A．步骤①所代表的过程是逆转录 B．步骤②需使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶 C．步骤③可用CaCl2处理大肠杆菌，使其从感受态恢复到常态 D．检验Q蛋白的免疫反应特性，可用Q蛋白与患禽流感康复的鸡的血清进行抗原—抗体特异性反应实验 4.(2012·开封市二次质检)α1－抗胰蛋白缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该致病患者常可采用注射人α1－抗胰蛋白酶来缓解症状。 (1)图1表示获取人α1－抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题： ①a过程是在____________的作用下完成的，该酶的作用特点是_________________ 。 ②c过程称为________________，该过程需要的原料是____________________。 ③要确定获得的基因是否是所需的目的基因，可以从分子水平上利用______________技术检测该基因的碱基序列。 (2)利用转基因技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1－抗胰蛋