森林动植物检疫学(08森保)第4章森林动植物检疫检验方法与技术.pptVIP

二、核酸杂交技术 核酸杂交是分子生物学的基本方法之一。该技术的基本原理是：采用特定的方法，标记已知微生物的核酸片段，利用该已知的核酸片段，检测待测样品中是否存在与之互补配对的核酸。该特定标记的已知微生物的核酸片段，称为核酸探针。[简单地说，核酸杂交就是用已知微生物的核酸片段（探针），检查待测样品中有没有这种已知微生物的 DNA] 核酸杂交具有敏感、特异、可同时检测大量样品等特点。杂交后的产物可干燥保存。杂交探针易于商业化生产，已广泛应用于各种植物病原的检测与鉴定。 （一）核酸探针的制备 核酸探针包括 DNA 及 RNA 探针。可用 PCR技术克隆已知微生物的核酸片段，作为探针。也可用直接提取基因组的方式，获得已知微生物的核酸片段，作为探针。探针必须是纯一的，而且必须为单链分子。 然后，对探针进行标记。标记探针的意义，在于便于检查杂交结果（通过化学发光、化学显色的方法检测）。常用的标记物如放射性同位素 32P 和非放射性的地高辛、光生物素等。可将这些标记物整合到探针的序列中。目前，主要用非放射性的物质作为标记物。 （二）核酸杂交 核酸杂交，通常在固相杂交膜，如醋酸纤维素膜和尼龙膜上进行。 先使核酸变性，完全解链， 再与探针充分杂交， 最后根据杂交信号的有无，判断杂交结果。 杂交方式，包括