荧光定量PCR实验技术干货.pptVIP

质粒标准品稀释方法 * 倍比梯度稀释方法： 1v原液(标准品i) +9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii +9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv +9v稀释缓冲液，得标准品v * 绝对定量实验例－－毕赤酵母A基因的绝对定量 * 方法：检测毕赤酵母的A基因 标准品：质粒标准品浓度为5个浓度；3个重复；设阴性空白对照 实验步骤： 提取A DNA； 设计特异引物； 设计TaqMan探针并标记探针； 荧光定量扩增； 结果分析：获取毕赤酵母的A的精确copy数。 * 绝对定量实验例－－毕赤酵母A基因的绝对定量 * Sample copies/ml Ct1 Ct3 Ct2 Mean Ct STD 标准品 1.41×105 22.33 22.20 22.46 22.33 0.13 标准品 1.41×106 18.70 18.32 18.61 18.54 0.20 标准品 1.41×107 15.09 15.15 15.37 15.20 0.19